外源性一氧化碳释放分子(CORM)2对脓毒症中凝血系统血小板活化的(部分)调节作用及分子机制

摘要

脓毒症(Sepsis)是指各种致病微生物或其毒素存在于血液或组织中，是机体对感染的一种全身性炎症反应(SIR)，表现为不能控制的炎症反应，是严重感染、重度创伤、大手术后，重型急性胰腺炎和休克等常见的并发症。其继续发展则可以导致全身炎症反应综合征(SIRS)、脓毒症和多器官功能障碍综合征(MODS)。脓毒症时由于炎性细胞因子的瀑布样释放，激活了凝血系统，同时纤溶系统及生理性的抗凝系统受到不同程度的抑制，血液处于高凝状态，微血管内微血栓广泛形成，导致微循环障碍，脓毒症进一步发展为严重脓毒症及脓毒症休克。脓毒症时内皮细胞活化表达组织因子(tissue factor，TF)增加进而激活外源性凝血系统；另外血小板活化、聚集形成病理性血栓，这在炎症和凝血之间复杂的相互作用中也占据着非常重要的中间位置。
　　 一氧化碳(carbon monoxide，CO)在机体内由血红素加氧酶(HO)催化血红素产生，CO过去曾被认为是破坏细胞呼吸作用的有害物质。近年来的研究发现CO是一种气体信号分子的，在离体和在体模型中对由内毒素诱导产生的各种细胞因子具有显著的抑制作用，我们前期研究也发现CO可以有效地缓解急性炎症反应，表现出重要的细胞保护作用和抗炎效用，但其机制尚未完全明确。
　　 近来，一种新合成的新型金属羰基化合物，一氧化碳释放分子(tricarbonyldichlororutheniumⅡ dimer，CORM—2)被证实可以在机体内缓慢释放CO，扩张主动脉，降低心肌缺血再灌注损伤，具有潜在的药用价值。而目前，有关外源性CO对脓毒症高凝状态的影响的相关研究还比较少。为此，在本研究中，我们通过建立小鼠CLP脓毒症模型及LPS刺激的人静脉血标本，并用CORM—2干预，进行在体和离体实验研究，旨在探讨外源性CO是否对脓毒症早期高凝状态具有抑制作用，并探讨CO可能的作用机制。
　　 第一部分高氧预处理联合外源性一氧化碳释放分子CORM—2对CLP小鼠血小板膜糖蛋白及血小板功能的调节作用
　　 目的：探讨高氧与CORM—2联合干预下CLP小鼠血小板膜糖蛋白及血小板功能指标的变化。
　　 方法：先使小鼠处于纯氧环境中0．5小时作为预处理，再行CLP处理及CORM—2干预。对不同时间段处理组小鼠先以双波长吸光度比值法检测血液中碳氧血红蛋白浓度(HBCO％)，并计算其存活率；分离富血小板血浆(PRP)，用流式细胞仪分析PRP中血小板膜糖蛋白CD41、CD61、CD62p水平，以检测脓毒症时血小板活化程度；最后取抗凝血，用玻球法分析血小板粘附率，用血小板聚集仪分析血小板聚集功能的变化，并制出聚集率曲线图，从功能上分析高氧联合CORM—2对CLP小鼠血小板的作用。
　　 结果：高氧联合CORM—2干预CLP小鼠后可以明显降低血液中HBCO的含量，并有效提高CLP小鼠的存活率；同时降低血浆中血小板膜糖蛋白CD61、CD62p(CD41变化不显著)表达，对活化后血小板粘附和聚集功能的亢进也有明显的抑制作用。
　　 结论：本研究采用高氧联合CORM—2对CLP小鼠进行干预，比单用CORM—2能更好地发挥外源性CO的作用。同时，从血小板活化及其功能指标的检测上也显示了高氧联合CORM—2可以在一定程度上抑制脓毒症早期凝血系统的活化，为脓毒症的治疗扩展了新思路。
　　 第二部分外源性一氧化碳释放分子(CORM)2对体外人血小板膜糖蛋白及血小板功能的调节作用
　　 目的：探讨体外条件下CORM—2干预经LPS刺激的人血小板膜糖蛋白及血小板功能指标的变化。
　　 方法：以LPS孵育人静脉血，刺激血小板活化，再予以CORM—2干预。用流式细胞仪分析PRP中血小板膜糖蛋白CD61、CD62p水平，以检测LPS刺激时血小板活化程度和CORM—2干预结果；最后取抗凝血，用玻球法分析血小板粘附率，用血小板聚集仪分析血小板聚集功能的变化，并制出聚集率曲线图，从功能上分析CORM—2对血小板的作用。
　　 结果：CORM—2可以降低LPS孵育后血浆中血小板膜糖蛋白CD61、CD62p的表达，对活化后血小板粘附和聚集功能的亢进也有明显的抑制作用。
　　 结论：从血小板活化及其功能指标的检测上显示了CORM—2可以在一定程度上抑制LPS刺激时凝血系统的活化，为脓毒症的治疗扩展了新思路。

目录

文摘

英文文摘

基金项目

引言

第一部分 高氧预处理联合外源性一氧化碳释放分子(CORM)2对CLP小鼠血小板活化(膜糖蛋白表达及血小板功能)的调节作用

第一节 CLP动物模型的建立

1.材料与方法

2.结果

3.结论

4.讨论

第二节 高浓度氧气预处理对CLP小鼠的影响

1.材料与方法

2.结果

3.结论

4.讨论

第三节 高氧预处理联合外源性一氧化碳释放分子(CORM)2对CLP小鼠血小板膜糖蛋白的干预作用

1.材料与方法

2.结果

3.结论

4.讨论

第四节 高氧预处理联合外源性一氧化碳释放分子(CORM)2对CLP小鼠血小板功能的影响

1.材料与方法

2.结果

3.结论

4.讨论

第二部分 外源性一氧化碳释放分子(CORM)2对体外人血小板活化(膜糖蛋白表达及血小板功能)的调节作用

第一节 体外人血小板炎症模型的建立

1.材料与方法

2.结果

3.结论

4.讨论

第二节 外源性一氧化碳释放分子(CORM)2对LPS刺激人血小板膜糖蛋白的干预作用

1.材料与方法

2.结果

3.结论

4.讨论

第三节 外源性一氧化碳释放分子(CORM)2对LPS刺激人血小板功能的影响

1.材料与方法

2.结果

3.结论

4.讨论

总结

参考文献

致谢

攻读研究生期间发表的论文

附录