水飞蓟宾葡甲胺眼用制剂对白内障动物模型治疗作用的研究

摘要

水飞蓟宾(silybin)来源于菊科植物水飞蓟(SliybummaruianumL．Gaertn.)的果实，是一种黄酮木脂素类化合物，其特点是毒性小、无致畸和诱变作用，具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎、降血脂等作用。白内障被认为是居首位的致盲因素，同时也是我国第一位的致盲眼病。目前世界上白内障的治疗以手术治疗为主，手术治疗有大量的术后并发症并且费用高。因此找到一种经济有效的治疗方法具有重要意义。本论文完善了水飞蓟宾葡甲胺(SNM)的高效液相色谱(HPLC)定量分析方法，并研究其合成工艺。然后对水飞蓟宾葡甲胺滴眼剂治疗大鼠糖性白内障药效学进行了初步研究。之后又探讨了水飞蓟宾葡甲胺眼凝胶剂处方，对其进行质量控制和稳定性研究，同时也对水飞蓟宾葡甲胺眼凝胶剂预防与治疗大鼠硒性白内障药效学进行了初步探究，主要研究内容及结论如下:
　　 (1)完善了水飞蓟宾葡甲胺的HPLC定量分析方法，可以作为水飞蓟宾葡甲胺的含量测定方法。通过对过滤与不过滤水飞蓟宾葡甲胺复合物样品的分析，证明了其中存在少量未复合的水飞蓟宾。最终根据所完善的分析方法测得样品中水飞蓟宾葡甲胺的含量为62.17％。因为后续试验剂型都是以样品中水飞蓟宾作为主药，所以按照不过滤样品数据得知样品中折合为水飞蓟宾的总含量为47.89％。通过对水飞蓟宾葡甲胺复合工艺的研究，确定了最佳的工艺条件为:水飞蓟宾与葡甲胺的摩尔投料比为1.05∶1，水飞蓟宾与无水乙醇的质量体积比为1∶15，葡甲胺与水的质量体积比为1∶2，反应温度为85℃，水浴回流2小时。通过氯化钠饱和溶液对水飞蓟宾葡甲胺进行了纯化。同时对水飞蓟宾葡甲胺进行了结构表征，结果显示所复合的产物为水飞蓟宾葡甲胺。
　　 (2)采用D-半乳糖成功复制大鼠糖性白内障模型，复制的大鼠糖性白内障模型与临床老年性白内障有相似的病理特征。水飞蓟宾葡甲胺滴眼剂可有效提高大鼠晶状体可溶性蛋白含量，且滴眼剂高剂量组与模型组比较有显著统计学差异(p＜0.05);降低晶状体以及血清中的丙二醛(MDA)含量，滴眼剂各剂量组与模型组比较均有显著统计学差异(p＜0.05)，说明抑制了大鼠脂质氧化的损伤，改善局部环境，从而促进组织修复。SNM滴眼剂、阳性药（吡诺克辛钠滴眼剂）对糖性白内障效果较好，而且SNM滴眼剂效果要好于吡诺克辛钠滴眼剂，有显著性差异。
　　 (3)确定了水飞蓟宾葡甲胺眼凝胶剂的处方:水飞蓟宾葡甲胺适量(使凝胶中水飞蓟宾含量为1.0mg·g-1)，2％的卡波姆-940，0.5％的吐温-80，0.2％的乙二胺四乙酸(EDTA)，0.02％的5％苯扎溴铵，用1mol·L-1NaOH调pH至8.0，足量水加至处方量。采用溶出度桨法，考察以卡波姆-940为基质制备的水飞蓟宾葡甲胺眼凝胶剂10h内在模拟泪液中的体外释放行为，发现呈现缓释现象。
　　 (4)经考察，凝胶样品的粒度、pH、标示量、回收率等各项指标均符合眼用制剂要求。样品对低温稳定，各项指标均没有明显变化。在高温40℃条件下，凝胶药物含量无显著变化，pH值有升高的趋势。综合考虑，本品宜在阴凉处保存。表明凝胶制备工艺合理，质量可控。
　　 (5)根据文献建立SD幼鼠硒性白内障模型成功，同时造模成功的白内障稳定，在给药期间没有自愈现象。通过实验表明，SNM眼凝胶剂可以一定程度的提高晶状体可溶性蛋白，眼凝胶剂低、高剂量组，与亚硒酸钠组比较有显著统计学差异(p＜0.05);降低其MDA含量，眼凝胶剂中、高剂量组与亚硒酸钠组比较有显著统计学差异(p＜0.05)，但是不能降低血清中MDA含量。SNM眼凝胶剂主要成分水飞蓟宾对早期白内障的发生、发展有延缓和预防作用，效果较为明显，对于已经形成的硒性白内障无明显的治疗作用，而且与吡诺克辛钠滴眼液相比，对硒性白内障疗效相当，没有明显优势。
　　 总之，水飞蓟宾对糖性白内障治疗效果更好，而且能够预防硒性白内障的发生。