兔脑外伤性脑缺血后相关处理的实验研究

摘要

目的：继发性脑损伤是重型颅脑外伤病人伤残和死亡的重要因素，特别是外伤后脑缺血是影响预后的非常关键的因素。外伤后继发的脑缺血导致神经元以及胶质细胞坏死和凋亡，从而加重脑损伤，而且病理变化过程比脑血管梗塞后的缺血缺氧更复杂。本实验通过缺血后处理及交感神经节离断的方法检测伤侧海马CA1区凋亡细胞、Caspase-3、Bcl-2、电镜观察微循环改变，探讨缺血后处理对兔脑外伤后缺血模型的保护作用，为外伤后脑缺血的临床治疗提供实验依据为临床治疗颅脑外伤后继发缺血提供思路。
　　 方法：实验一:将30只新西兰白兔随机分为3组:假手术组、常规减压组、缺血后处理组。假手术组仅放置硬膜外球囊及颅内压力探头，常规减压组达到维持时间(30分钟)后放出球囊内液体减压，缺血后处理组在常规减压后行双侧颈内动脉临时阻断15秒再通15秒，反复3次。
　　 实验二:将30只新西兰白兔随机分为3组:假手术组、常规减压组、颈交感神经干离断组。假手术组仅行放置硬膜外球囊及颅内压探头，常规减压组达到维持时间(30分钟)后放出球囊内液体减压，颈交感神经干离断组在常规减压后行右侧颈交感神经干离断术。以上每组自由饲养24小时后断头取脑。应用免疫组化及电镜拍照观察。取伤侧海马检测CA1区凋亡细胞、Caspase-3、Bcl-2、电镜观察微循环改变。
　　 结果：1.本实验观察到术后24h假手术组极少出现凋亡细胞。
　　 2.缺血后处理组及交感神经离断组海马CA1区凋亡细胞数较常规减压组明显减少(P＜0.05)。
　　 3.caspase-3蛋白表达阳性染色比较发现，缺血后处理组及交感神经离断组显著低于常规减压组，差异具有统计学意义(P＜0.05)。
　　 4.Bcl-2蛋白表达阳性染色比较，缺血后处理组明显及交感神经离断组高于常规减压组，具有显著统计学差异(P＜0.05)。
　　 5.对于外伤后脑缺血，缺血后处理及交感神经离断可以通过抑制caspase-3表达、上调Bcl-2表达而减少细胞凋亡发生。
　　 6.通过电镜观察，缺血后处理及交感神经节离断可明显改善外伤后脑微循环。结论缺血后处理及交感神经离断可以减少兔脑外伤后海马CA1区神经细胞凋亡的表达及改善微血管循环。为临床外伤后脑缺血的治疗提供实验依据。

目录

声明

摘要

第一章 前言

1．1 外伤性脑缺血概述

1．2 研究目的及意义

1．2．1 目的

1．2．2 意义

第二章 缺血后处理对兔外伤后脑缺血的影响

2．1 材料

2．1．1 实验动物

2．1．2 试剂与仪器

2．2 方法

2．2．1 动物分组与模型建立

2．2．2 冰冻切片的制作方法(低温恒冷箱冷冻切片制作法)

2．2．3 TUNEL法检测细胞凋亡(过氧化物酶标记测定法)

2．2．4 冰冻切片的免疫组织化学实验步骤

2．2．5 透射电镜生物样品制备步骤

2．3 统计学处理

2．4 结果

2．4．1 凋亡细胞的表达

2．4．2 海马CA1区Caspase-3表达

2．4．3 海马CA1区Bcl-2表达

2．4．4 脑微循环超微结构改变

2．5 讨论

第三章 颈交感神经干离断对兔外伤后脑缺血模型的影响

3．1 材料

3．1．1 实验动物

3．1．2 试剂与仪器

3．2 方法

3．2．1 动物分组与模型的建立

3．2．2 冰冻切片的制作方法

3．2．3 TUNEL法检测细胞凋亡

3．2．4 冰冻切片的免疫组织化学实验步骤

3．2．5 透射电镜生物样品制备步骤

3．3 统计学处理

3．4 结果

3．4．1 凋亡细胞的表达

3．4．2 海马Caspase-3表达

3．4．3 Bcl-2

3．4．4 脑微循环超微结构改变

3．5 讨论

参考文献

综述

附录

攻读硕士学位期间发表的文章

致谢