苍术素诱导人胃癌MKN-45细胞凋亡的实验研究

摘要

目的:
　　探讨苍术素(Atractylodin)抑制人胃癌MKN-45细胞增殖的作用及其作用机制，为研发新型抗肿瘤药物提供实验依据和理论基础。
　　方法:
　　1.倒置显微镜观察苍术素对MKN-45细胞形态的影响;MTT法测定苍术素诱导MKN-45细胞半数致死的药物浓度和时间。
　　2.荧光显微镜结合Hoechst33258/PI染色观察苍术素对MKN-45细胞凋亡形态的影响。
　　3.流式细胞仪结合PI染色和Annexin V/PI染色检测苍术素对MKN-45细胞的细胞周期的影响及细胞凋亡率。
　　4.Western blot法检测经苍术素处理后MKN-45细胞相关凋亡蛋白表达的变化。
　　5.液相芯片法检测苍术素对MKN-45细胞分泌相关细胞因子的影响。
　　结果:
　　1.不同浓度苍术素作用于MKN-45细胞后，浓度在5mg/L和10mg/L时促进细胞增殖;浓度大于20mg/L时，抑制细胞增殖，且抑制作用呈时间和浓度依赖性。
　　2.光镜和荧光显微镜下可见经浓度大于20mg/L的苍术素处理12h后的细胞出现细胞凋亡的形态学特征。
　　3.流式细胞仪结果可见MKN-45细胞的细胞周期停滞在G1期，凋亡细胞数量随时间和浓度的增加而增多。
　　4.Western blot结果显示经苍术素处理后，MKN-45细胞的PARP-1的表达量明显增高，AIF被激活;caspase3、caspase8和caspase9未被激活，caspase3和caspase9前体蛋白表达量不变。
　　5.液相芯片结果表明，苍术素抑制MKN-45细胞分泌IL-6、TNF-α、IL-10和IL-12p70，诱导细胞分泌IL-7和IL-1β。
　　结论:
　　本研究结果显示，苍术素抑制MKN-45细胞增殖，且抑制作用呈时间和浓度依赖性。苍术素通过阻断细胞周期、使细胞周期停滞在G1期，经由非依赖caspase的PARP-1/AIF信号通路诱导细胞凋亡和影响细胞相关细胞因子的分泌来抑制MKN-45细胞的增殖。

目录

声明

摘要

英文缩略词表

第一章 绪论

1．1 研究背景

1．1．1 细胞凋亡

1．1．2 苍术素概况

1．2 本研究的目的、意义、内容及研究路线

1．2．1 研究目的及意义

1．2．2 研究内容

1．2．3 研究路线

第二章 苍术素对人胃癌MKN-45细胞增殖抑制作用的研究

2．1 材料

2．1．1 细胞系及药物

2．1．2 主要试剂

2．1．3 主要溶液配制

2．1．4 主要仪器

2．2 方法

2．2．1 苍术素母液的制备

2．2．2 细胞复苏

2．2．3 细胞培养

2．2．4 细胞计数

2．2．5 细胞冻存

2．2．6 倒置显微镜观察苍术素对胃癌MKN-45细胞形态的影响

2．2．7 MTT法检测苍术素对胃癌MKN-45细胞增殖的抑制作用

2．2．8 流式细胞仪检测苍术素诱导MKN-45细胞周期的变化(PI染色)

2．2．9 统计学分析

2．3 结果

2．3．1 苍术素对MKN-45细胞形态的影响

2．3．2 苍术素对MKN-45细胞增殖的影响

2．3．3 苍术素对MKN-45细胞周期的影响

2．4 讨论

第三章 苍术素抑制人胃癌MKN-45细胞增殖机制的研究

3．1 材料

3．1．1 试剂

3．1．2 主要溶液配制

3．1．3 主要仪器

3．2 方法

3．2．1 细胞培养

3．2．2 荧光显微镜观察苍术素对MKN-45细胞凋亡形态的影响

3．2．3 流式细胞仪检测苍术素对MKN-45细胞凋亡率的影响(Annexin V／PI染色)

3．2．4 Western blot检测苍术素对MKN-45细胞凋亡蛋白表达的影响

3．2．5 统计学分析

3．3 结果

3．3．1 苍术素对MKN45细胞凋亡的形态变化

3．3．2 苍术素对MKN-45细胞凋亡率的影响

3．3．3 苍术素对MKN-45细胞相关凋亡蛋白表达的影响

3．4 讨论

第四章 苍术素对人胃癌MKN-45细胞相关细胞因子分泌影响的研究

4．1 材料

4．1．1 试剂和耗材

4．1．2 主要溶液配制

4．1．3 主要仪器

4．2 方法

4．2．1 细胞培养

4．2．2 液相芯片法检测苍术素对MKN-45细胞相关细胞因子分泌的影响

4．2．3 统计学分析

4．3 结果

4．3．1 苍术素对MKN-45细胞相关细胞因子分泌的影响

4．4 讨论

第五章 主要结论和展望

5．1 主要结论

5．2 展望

参考文献

致谢

硕士期间发表的论文和参与的项目