内质网应激反应在姜黄素对乳腺癌细胞的增殖抑制和凋亡诱导中的作用研究

摘要

目的:
　　姜黄素(Curcumin，Cur)，是在姜科植物中提取得到的一种多酚类物质。近年的研究已证实姜黄素对乳腺癌、卵巢癌、肺癌、前列腺癌等的治疗均有显著疗效。研究表明姜黄素还可以增强化疗药物的敏感性，毒副作用低。本研究中，以MCF-7细胞、MDA-MB-231细胞为研究对象，阐明:1）姜黄素对两株乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231细胞的增殖和凋亡影响;2）姜黄素在乳腺癌细胞中诱导的内质网应激反应(endoplasmic reticulum stress，ERS)的影响;3）ERS在姜黄素诱导的细胞增殖和凋亡过程中潜在机制，为抗肿瘤药物以及药物的联合使用提供理论依据;4)氧化应激对ERS在细胞调控中的作用。
　　方法:
　　1)通过MTT法检测不同处理时间(6、12、24、24 h)以及不同浓(con、2.5、5、10、20、50μmol/L)的姜黄素对乳腺癌细胞增殖抑制的影响;TUNEL法检测姜黄素诱导细胞凋亡的作用;Western Blotting检测细胞凋亡的相关蛋白;2)con、5、10、20、50μmol/L姜黄素处理乳腺癌细胞，检测ERS相关蛋白蛋白的表达;3)ERS抑制剂以及诱导剂预处理乳腺癌细胞，MTT法检测姜黄素抑制细胞增殖的作用;TUNEL法检测姜黄素诱导乳腺癌细胞凋亡作用;Western Blotting检测ERS相关的蛋白表达变化;免疫荧光检测ERS相关凋亡蛋白CHOP的表达;4)抗氧化剂NAC预处理乳腺癌细胞，加姜黄素处理24 h，DCF-DA探针检测细胞内活性氧(ROS)的生成;MTT法检测姜黄素对细胞增殖抑制的作用;TUNEL法检测姜黄素诱导的细胞凋亡作用;5)N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理乳腺癌细胞，Western Blotting检测ERS相关蛋白表达量的变化。
　　结果:
　　1)姜黄素对乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231的增殖抑制作用呈时间-剂量效应，诱导细胞的凋亡，并且使凋亡相关蛋白的表达被上调;
　　2)姜黄素可使GRP78、p-PERK、p-eIF2α等ERS相关蛋白被上调，激活ERS;持续并且强烈的ERS可通过未折叠蛋白反应(unfolded protein response，UPR)，诱导细胞凋亡;
　　3)ERS抑制剂预处理后，姜黄素对乳腺癌细胞的增殖抑制和凋亡诱导的作用明显增强;ERS诱导剂预处理后，姜黄素对乳腺癌细胞的增殖抑制和凋亡诱导无明显影响;ERS抑制剂、诱导剂分别预处理后，姜黄素可使细胞内GRP78的表达发生明变化;
　　4)姜黄素可使细胞内ROS的生成升高，而NAC预处理可减缓姜黄素对乳腺癌细胞的增殖抑制和细胞凋亡的作用;
　　5) NAC预处理乳腺癌细胞，可使ERS相关蛋白的表达上调。
　　结论:
　　姜黄素可抑制乳腺癌细胞增殖并诱导细胞凋亡，ERS在姜黄素对乳腺癌细胞的增殖抑制和凋亡诱导中可能是一种适应性反应，并且氧化应激在姜黄素诱导的ERS中可能具有调控作用。

目录

声明

摘要

英文缩略语

第一章 绪论

1．1 姜黄素

1．1．1 姜黄素的理化性质

1．1．2 姜黄素的用途

1．2 姜黄素抗肿瘤的机制

1．3 乳腺癌

1．4 内质网应激与凋亡

1．5 研究目的与意义

1．5．1 研究目的

1．5．2 研究意义

1．6 实验设计

1．6．1 研究内容

1．6．2 技术路线

第二章 姜黄素对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

2．1 材料和方法

2．1．1 材料

2．1．2 方法

2．1．3 统计分析

2．2 结果

2．2．1 姜黄素对乳腺癌细胞增殖的影响

2．2．2 姜黄素对乳腺癌细胞凋亡的影响

2．3 讨论

2．4 小结

第三章 姜黄素对乳腺癌细胞ERS的影响研究

3．1 材料和方法

3．1．1 材料

3．1．2 方法

3．1．3 统计分析

3．2 结果

3．2．1 姜黄素对乳腺癌细胞ERS相关蛋白表达的影响

3．2．2 姜黄素对乳腺癌细胞ERS相关凋亡蛋白表达的影响

3．3 讨论

3．4 小结

第四章 调节ERS对姜黄素在乳腺癌细胞增殖抑制和凋亡诱导中的作用研究

4．1 材料和方法

4．1．1 材料

4．1．2 方法

4．1．3 统计分析

4．2 结果

4．2．1 ERS抑制剂对姜黄素在乳腺癌细胞增殖抑制和凋亡诱导中的影响

4．2．2 ERS诱导剂对姜黄素在乳腺癌细胞增殖抑制和凋亡诱导中的影响

4．2．3 调节ERS对姜黄素在乳腺癌细胞中ERS相关蛋白表达的影响

4．3 讨论

4．4 小结

第五章 抗氧化剂对姜黄素在乳腺癌细胞增殖抑制和凋亡诱导中的研究

5．1 材料和方法

5．1．1 材料

5．1．2 方法

5．1．3 统计分析

5．2 结果

5．2．1 活性氧(ROS)的检测

5．2．2 抗氧化剂对姜黄素在乳腺癌细胞中增殖抑制的影响

5．2．3 抗氧化剂对姜黄素诱导的乳腺癌细胞凋亡的影响

5．3 讨论

5．4 小结

第六章 抗氧化剂对姜黄素诱导的乳腺癌细胞ERS的影响研究

6．1 材料和方法

6．1．1 材料

6．1．2 方法

6．1．3 统计分析

6．2 结果

6．3 讨论

6．4 小结

第七章 结论和展望

参考文献

致谢

攻读硕士期间发表的学术论文及参加的学术会议