EGFR诱导PPARγ泛素化降解机制

摘要

癌症已被列为当前导致死亡的主要疾病之一。在我国，癌症的发病率与死亡率呈持续上升趋势，且我国部分地区医疗保障不够完善，癌症已经成为阻碍地区经济发展和提高人们生活水平的重要障碍。因此，深入研究癌症发病机制和治疗方法显得越来越重要而紧迫。EGFR作为一种细胞膜激酶受体，其代谢失调或者过表达存在于在多种癌症中，而EGFR在肿瘤发生中的机制仍不清楚。PPARγ作为细胞核受体蛋白，在调节炎症和肿瘤中起着非常重要的作用。在本研究中我们发现EGFR通过招募MDM2泛素化连接酶到PPARγ，进一步诱导PPARγ的泛素化、降解，从而促进肿瘤细胞的存活、增殖。已取得的显著性结果如下:
　　1、激活的EGFR显著降低PPARγ蛋白水平，但是并没有改变PPARγ基因水平。
　　2、利用免疫共沉淀实验分析表明激活的EGFR直接绑定PPARγ，而EGFR酪氨酸激酶抑制剂gefitinib，可以终止两者的相互绑定。进一步研究发现PPARγ的“201-300aa”这一片段是绑定EGFR的关键部位。
　　3、激活的EGFR诱导PPARγ泛素化。与此相反，利用EGFR激酶抑制子(gefitinib)处理后，抑制了PPARγ泛素化。
　　4、进一步研究发现EGFR介导PPARγ的降解是通过招募MDM2泛素化连接酶到PPARγ，从而诱导PPARγ的泛素化、降解。
　　5、虽然PPARγ抑制肿瘤相关基因的表达和肿瘤细胞的增殖，但是，激活的EGFR终止了这一过程，这和EGFR诱导PPARγ泛素化降解是一致的。
　　6、免疫组化分析表明在正常组织中PPARγ表达水平很高，但是EGFR低表达。相反地，在肿瘤组织中PPARγ表达水平很低但是EGFR表达水平很高。这也和EGFR诱导PPARγ泛素化降解是一致的。

目录

声明

摘要

第一章 绪论

1．1 过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)

1．1．1 PPARγ概论

1．1．2 PPARγ和肿瘤

1．1．3 PPARγ配体和肿瘤

1．1．4 PPARγ配体联合药物治疗

1．1．5 PPARγ作为泛素连接酶的抗肿瘤作用

1．2 表皮生长因子受体(EGFR)

1．2．1 EGFR概论

1．2．2 肿瘤细胞中的EGFR

1．2．3 常见的EGFR酪氨酸激酶活性抑制剂

1．3 本研究的意义

1．4 主要研究内容和技术路线

1．4．1 主要研究内容

1．4．2 技术路钱

第二章 激活的EGFR诱导PPARγ蛋白水平降低

2．1 实验材料

2．1．1 实验细胞系

2．1．2 实验仪器

2．1．3 主要实验试剂

2．2 实验方法

2．2．1 不同细胞系中EGFR与PPARγ蛋白的表达水平

2．2．2 激活的EGFR降低PPARγ蛋白水平

2．2．3 gefitinib抑制EGFR活性时PPARγ蛋白水平的变化

2．2．4 饥饿刺激条件下PPARγ蛋白水平的变化

2．2．5 过表达EGFR对PPARγ蛋白水平的影响

2．2．6 激活的EGFR对PPARγ基因表达水平的影响

2．3 实验结果与分析

2．3．1 不同细胞系中EGFR与PPARγ蛋白的表达水平

2．3．2 激活的EGFR降低PPARγ蛋白水平

2．3．3 gefitinib抑制EGFR活性时PPARγ蛋白水平的变化

2．3．4 饥饿刺激条件下PPARγ蛋白水平的变化

2．3．5 过表达EGFR对PPARγ蛋白水平的影响

2．3．6 EGF对PPARγ基因水平的影响

2．4 本章小结

第三章 EGFR和PPARγ的相互作用

3．1 实验材料

3．1．1 实验细胞系和菌种

3．1．2 实验仪器

3．1．3 主要实验试剂

3．2 实验方法

3．2．1 pCMV6-AC-RFP-PPARγ的构建

3．2．2 EGFR和PPARγ相互作用的研究

3．3 实验结果与分析

3．3．1 pCMV6-AC-RFP-PPARγ的构建

3．3．2 EGFR和PPARγ相互作用的研究

3．4 本章小结

第四章 EGFR诱导PPARγ泛素化降解

4．1 实验材料

4．1．1 实验细胞系

4．1．2 实验仪器

4．1．3 主要实验试剂

4．2 实验方法

4．2．1 激活的ESFR介导PPARγ泛素化研究

4．2．2 MDM2 E3连接酶介导PPARγ的泛素化

4．3 实验结果与分析

4．3．1 激活的EGFR介导PPARγ泛素化研究

4．3．2 MDM2 E3连接酶介导PPARγ的泛素化

4．4 本章小结

第五章 EGFR／PPARγ信号机制在肿瘤细胞中的作用

5．1 实验材料

5．1．1 实验细胞系

5．1．2 实验仪器

5．1．3 主要实验试剂

5．2 实验方法

5．2．1 结肠正常组织与结肠肿瘤组织中EGFR和PPARγ的表达水平

5．2．2 EGFR终止PPARγ的抗增殖作用

5．2．3 EGFR终止PPARγ的抗肿瘤细胞集落形成能力

5．2．4 EGFR终止PPARγ对肿瘤相关基因表达的抑制作用

5．3 实验结果与分析

5．3．1 结肠正常组织与结肠肿瘤组织中EGFR和PPARγ的表达水平

5．3．2 EGFR终止PPARγ抗肿瘤细胞增殖能力

5．3．3 EGFR终止PPARγ抗肿瘤细胞软琼脂集落形成能力

5．3．4 EGFR终止PPARγ对肿瘤相关基因表达的抑制作用

5．4 本章小结

第六章 总结

6．1 激活的EGFR诱导PPARγ蛋白水平降低

6．2 EGFR和PPARγ存在直接相互作用

6．3 激活的EGFR介导PPARγ蛋白泛素化

6．4 正常组织与肿瘤组织中EGFR与PPARγ蛋白水平的相关性

6．5 EGFR／PPARγ信号分子机制对细胞存活率和肿瘤相关基因表达的影响

参考文献

致谢

在学期间的学术成果

参加课题