人脐带间充质干细胞来源exosomes的安全性评价

摘要

背景目的：临床Ⅰ期和Ⅱ期实验已经证实间充质干细胞(MSCs)可以对急性心肌梗死(AMI)进行损伤修复，但是由于MSCs存在移植存活率低、加重狭窄及致瘤性安全隐患等不足使得其在临床上的应用受到限制。越来越多的证据表明，以MSCs旁分泌来源的exosomes(MSC-exosomes)为基础的移植比MSCs本身更具有潜在的保护作用和修复效果。但是，MSC-exosomes的应用是否安全可靠还尚不清楚。在本实验中，我们采用了多种动物模型，比较全面地评估了人脐带间充质干细胞来源的exosomes(hucMSC-exosomes)的安全性。
　　方法：取来自健康家兔的心脏血液，去除纤维蛋白原后，取沉淀的红细胞(RBC)用生理盐水配制成2％的RBC悬液，与hucMSC-exosomes37℃共温浴，在3h内观察其溶血和RBC沉降情况；分别将hucMSC-exosomes沿耳缘静脉和股四头肌注入家兔体内，观察血管充血是否正常，周围组织有无肿胀，注射点肌纤维横纹是否清晰，肌间有无出血，有无炎性细胞浸润等病理变化，并取注射点部位血管、肌肉及周围组织做组织学切片，采用苏木精-伊红(H&E)染色的方法，综合评价hucMSC-exosomes是否具有刺激性；对豚鼠腹腔注射 hucMSC-exosomes，每隔一天致敏1次，第3次致敏14天后进行末次致敏，观察并记录豚鼠的过敏症状以及症状所出现的时间，综合评价 hucMSC-exosomes是否含有过敏原；将hucMSC-exosomes沿耳缘静脉输注入家兔体内，每隔一小时测定1次肛温，总共3次，根据温度的变化程度来分析其是否含有致热源；取健康Sprague-Dawley(SD)大鼠，尾静脉注射hucMSC-exosomes，定期采血并测定hucMSC-exosomes对血常规指标的影响；为了评价hucMSC-exosomes在体内的安全性，我们建立了SD大鼠的AMI模型，分别选取400μg和800μg剂量的hucMSC-exosomes沿尾静脉注射入大鼠体内，每天1次，连续7天，之后密切观察SD大鼠的生长情况，并定期对其称重采血，检测hucMSC-exosomes对肝功能及肾功能是否有不良影响。结果：hucMSC-exosomes不会引起溶血反应，对注射点的血管、肌肉及周围组织都没有刺激性，不含有过敏原和致热源，对血常规指标没有不良影响，对 AMI模型的大鼠体重的降低有一定的缓解作用并且对肝功能、肾功能都没有副作用，各项结果都显示hucMSC-exosomes是安全可靠可以被应用的。
　　结论：hucMSC-exosomes在动物模型中耐受并且通过静脉输注的方式安全可靠，这为今后hucMSC-exosomes的临床应用提供了依据。

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图表目录

第一章 绪论

1.1 间充质干细胞

1.2 Exosomes

第二章 研究目的、方法、实验设计方案和意义

2.1研究目的

2.2研究方法

2.3实验设计方案

2.4研究意义

第三章hucMSC-exosomes的分离及鉴定

3.1 材料与仪器

3.2 方法

3.3 结果

3.4 讨论

第四章hucMSC-exosomes对AMI模型的影响

4.1材料与仪器

4.2 方法

4.3 结果

4.4 讨论

第五章hucMSC-exosomes自身安全性鉴定

5.1材料与仪器

5.2 方法

5.3 结果

5.4 讨论

结论与展望

结论

展望

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间发表的学术论文