miR-21、miR-29c和miR-182测定对恶性胸腔积液的诊断评价

摘要

背景与目的： 良性和恶性胸腔积液二者之间的鉴别诊断是临床内科各个科室经常遇见的问题。恶性胸腔积液患者的病情进展迅速，中位生存期较短，尽早的诊断和及时的治疗可改善患者的预后。目前临床上主要通过测定胸腔积液患者胸液标本中癌胚抗原（carcino embryonic antigen，CEA）、神经元特异性烯醇化酶（neuron-specific enolase，NSE）、鳞癌抗原（squamous cell carcinoma antigen，SCC）等肿瘤标志物的水平，以及利用胸腔积液脱落细胞学检测和胸膜活检病理检查等方法进行诊断，但这些检测或检查方法的敏感性和特异性均较低。本研究通过检测良恶性胸腔积液患者胸腔积液标本中 miR-21、miR-29c 和 miR-182 的表达水平，探讨这三个miRNAs在良性和恶性胸腔积液鉴别诊断中的应用价值。以期找到兼具高特异性和高敏感性可用于诊断恶性胸腔积液的生物标志物。 方法： 1、研究对象：选取2015年4月至2017年6月在江苏大学附属医院呼吸科、重症监护室和急诊科初次就诊并且未接受任何治疗的恶性胸腔积液患者65例及良性胸腔积液患者61例作为研究对象。 2、标本处理：收取上述研究对象的胸腔积液标本200mL置于装有抗凝剂乙二胺四乙酸（EDTA）的离心管中，1 小时内进行离心处理。之后依次进行提取总RNA，逆转录合成cDNA，选取U6作为管家基因，最后应用荧光定量聚合酶链式反应（RT-PCR）检测胸腔积液标本中miR-21、miR-29c、miR-182和U6的Ct值。应用2-△△Ct计算公式计算miR-21、miR-29c、miR-182的相对表达量。其中△△Ct = (实验组目的基因Ct－实验组U6 Ct)－(正常组目的基因Ct－正常组U6 Ct)。同时留取10mL胸腔积液送至江苏大学附属医院核医学科测定CEA水平。 3、统计学分析：应用SPSS 21.0 version统计学软件对miR-21、miR-29c、miR-182的测定结果进行分析。所得数据以均数±标准误表示。构建受试者工作特征（ROC）曲线，获取曲线下面积（AUC），确定miR-21、miR-29c和miR-182诊断恶性胸腔积液的临界值，进而计算出这三个miRNAs应用于诊断恶性胸腔液的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值及准确度。结果： 1、恶性胸腔积液标本中 miR-21 和 miR-182 的表达水平明显高于良性胸腔积液标本，而恶性胸腔积液标本中miR-29c的表达水平明显低于良性胸腔积液标本。 2、胸腔积液 miR-21、miR-29c 和 miR-182 用于诊断恶性胸腔积液的 AUC值分别为 0.873（95%CI：0.808-0.939）、0.856（95%CI：0.790-0.920）和 0.841 （95%CI：0.772-0.911），均高于胸液CEA诊断恶性胸腔积液的AUC值（0.822；95%CI：0.703-0.873）。 3、胸腔积液miR-21、miR-29c和miR-182用于诊断恶性胸腔积液的敏感性和特异性分别为（83.1%、85.2%）、（78.5%、81.5%）和（83.1%、73.4%）。胸腔积液 CEA 用于诊断恶性胸腔积液的敏感性和特异性分别为 75.4%和 71.2%，低于上述三个miRs诊断恶性胸腔积液的敏感性和特异性。 4、联合测定胸液miR-21、miR-29c、miR-182和CEA诊断恶性胸腔积液的AUC、敏感性、特异性及准确性高于其中任何一个标志物单独测定计算的结果。结论： miR-21、miR-29c和miR-182有可能成为临床上诊断恶性胸腔积液有价值的生物标志物。

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