异质性耐药铜绿假单胞菌的检测和耐药机制的分析

摘要

目的： 当前亚胺培南（Imipenem，IMP）异质性耐药的铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa， PA）数量和耐药性日益增加，已成为院内感染的重要细菌，对临床治疗带来较大苦难。IMP异质性耐药的PA的耐药机制比较复杂，尚未完全阐明，因此该类细菌应引起临床足够的重视。本研究就常州部分地区IMP异质性耐药的PA五年来流行病学、耐药种类和耐药机制进行了初步的探讨，试图为临床预防该菌引起的院内感染提出预警作用和有助于临床治疗。 分析常州部分地区五年内IMP异质性耐药PA的耐药情况，研究该类细菌的耐药机制，检测医院常见的5种消毒剂对该类细菌的消毒效果，为医院控制院内交叉感染提供指导。 方法： IMP异质性耐药的检测及机制研究：菌谱分析计算耐药亚群出现频率，双纸片协同实验筛选金属β-内酰胺酶表型，逆转录实时定量PCR检测细菌主动外排系统，结晶紫半定量试验检测生物膜，PCR扩增法检测耐药基因OPRD２的缺失和消毒剂相关基因qacE△1-sul1。 消毒效果研究：中和剂鉴定试验测定中和剂浓度，肉汤稀释法测定最低抑菌浓度（ Minimum inhibitory concentration ， MIC ）和最低杀菌浓度（ Minimum bactericidal concentration，MBC），悬液定量杀菌试验测定杀菌率。 统计学方法：用卡方检验和配对资料T检验对相关数据进行处理和分析。 结果： 从流行病学分析发现：常州部分地区在2013年到2017年期间，PA检出率居高不下。痰液标本和呼吸内科标本数量最多。耐药率最高的是哌拉西林，为28.1%；耐药率最低的是阿米卡星。碳青霉烯类耐药最严重的标本类型是痰液标本，碳青霉烯类药物耐药最严重的科室是ICU。其中发现有36株IMP异质性耐药的PA，数量最多的仍是痰液标本和呼吸内科标本，耐药率最高的是左旋氧氟沙星和哌拉西林，以下依次还有环丙沙星、头孢他啶、替卡西林/克拉维酸、庆大霉素、头孢吡肟，阿米卡星，妥布霉素，亚胺培南和哌拉西林/他唑巴坦。 通过异质性耐药筛选试验获得的36株IMP异质性耐药PA，菌谱分析结果得出PA对于IMP异质性耐药的变异频率约在 8.9×10-7～4.5×10-9之间。双纸片协同实验显示此36株IMP异质性耐药的PA均不产MBL。逆转录实时定量PCR检测发现该36株IMP异质性耐药的PA高表达外排泵。结晶紫半定量试验检测发现36株IMP异质性耐药的PA生物膜形成量明显高于对照组。PCR扩增法检测发现6株膜孔蛋白OPRD２基因缺失菌株，还发现3株氨基糖苷类修饰酶qacE△1-sul1基因阳性菌株。对消毒剂抵抗研究发现：医院常用的五种消毒剂（含氯消毒剂、戊二醛，碘伏、乙醇和氯己定）中，IMP异质性耐药的PA对含氯消毒剂，碘伏和乙醇更为敏感。 结论： 36株IMP异质性耐药的PA的耐药机制可能和外排泵的高表达、生物膜的形成以及耐药基因的产生有关，应选择含氯消毒剂，碘伏和乙醇三种消毒剂进行院内消毒，防止院内感染的发生和扩散。

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引 言

第一章 PA的耐药情况分析

1.1材料与方法