肝受体功能显像剂Tc-GHSA-IFNα2b的研制

摘要

据权威专家报告全球各类肝脏疾病的发病状况和防治现状不容乐观。全世界现有慢性乙肝病毒携带者约为3.5亿人；丙肝病毒感染者约为1.7亿人。目前，病毒性肝炎的治疗尚无特效药，主要采用α-干扰素等来治疗，但由于普通干扰素具有生物半衰期短的缺点，国内外学者争相研究长效干扰素，其中白蛋白融合干扰素是一个重要的研究方向。而人血清白蛋白融合干扰α2b(HumanSerumAlbuminInterferonα2bFusionProtein,HSA-IFNα2b)在肝脏中药物浓度不高，不能够有效靶向肝脏。 为了提高HSA-IFNα2b的肝靶性，我们制备了半乳糖基化人血清白蛋白融合干扰素α2b(GalactosylatedHumanSerumAlbuminInterferonα2bFusionProtein，GHSA-IFNα2b)并进行了分析，其平均糖密度约为24。 同时探讨了放射性99Tcm标记GHSA-IFNα2b在动物体内靶向肝脏的特性。采用氯化亚锡(SnCl2)还原法制备99Tcm-GHSA-IFNα2b，以聚酰胺薄膜为支持介质、20mmol/LPBSpH7.2:10％SDS:丙酮(V:V:V)=3:1:1为展开剂，测定标记物的标记率；研究了SnCl2和GHSA-IFNα2b的用量以及溶液pH对99Tcm-GHSA-IFNα2b标记率的影响。结果表明，在pH=3.0-4.5、GHSA-IFNα2b的用量大于0.3mg、SnCl2的用量大于3μg小于60μg时，37℃反应30min，可获得标记率大于90％的99Tcm-GHSA-IFNα2b，并在6h内保持基本稳定。 ICR小鼠尾静脉注射99Tcm-GHSA-IFNα2b(0.286MBq/只，n=6)，于5、10、15、30、60、120min分别取脑、心、肝、胆、脾、肺、肾、胃、肠、胰、血，称重、计数，计算ID％/organ和ID％/g；并对99Tcm-GHSA-IFNα2b的SD大鼠进行了显像研究。结果显示，注射后10min肝脏组织中的99Tcm-GHSA-IFNα2b即可高达52.51ID％/organ，肠道放射性随时间而增加，说明99Tcm-GHSA-IFNα2b能够被肝脏特异性摄取，且主要通过胆道、肠道和肾脏排泄；大鼠静脉注射15-30min时，即可获得清晰的肝显像。 综上所述，GHSA-IFNα2b有望成为新型靶向肝脏的干扰素，99Tcm-GHSA-IFNα2b有望成为新型的肝受体功能显像剂。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章绪论

1.1概述

1.2干扰素

1.2.1干扰素概况

1.2.2干扰素分类

1.2.3干扰素理化特性

1.2.4干扰素生物学功能及作用机理

1.2.5临床应用

1.3长效重组蛋白

1.3.1研究背景

1.3.2长效制剂

1.3.3化学修饰

1.3.4血白蛋白融合

1.4靶向药物

1.4.1研究背景

1.4.2 ASGP-R的结构及功能

1.4.3 ASGP-R介导的肝靶向制剂

1.5立题背景及研究内容

第二章GHSA-IFNα2b的制备与分析

引言

2.1实验材料、仪器

2.1.1实验材料

2.1.2实验仪器

2.2实验方法

2.2.1 GHSA-IFNα2b的制备

2.2.2 GHSA-IFNα2b的分子量测定与糖密度分析

2.2.3 GHSA-IFNα2b的抗病毒活性分析

2.3实验结果与讨论

2.3.1GHbA-IFNα2b的制备

2.3.2 GHSA-IFNα2b的分子量测定与糖密度分析

2.3.3 GHSA-IFNα2b的抗病毒活性分析

2.4本章小结

第三章99Tcm-GHSA-IFNα2b的制备与分析

引言

3.1实验材料、仪器

3.1.1实验材料

3.1.2实验仪器

3.2实验方法

3.2.1 99Tcm-GHSA-IFNα2b的制备

3.2.2 99Tcm-GHSA-IFNα2b的体外稳定性

3.3结果与讨论

3.3.1 99Tcm-GHSA-IFNα2b的制备

3.3.2 99Tcm-GHSA-IFNα2b的体外稳定性

3.4本章小结

第四章99Tcm-GHSA-IFNα2b动物实验研究

引言

4.1实验材料、仪器

4.1.1实验材料

4.1.2实验仪器

4.2实验方法

4.2.1 99Tcm-GHSA-IFNα2b的制备

4.2.2 99Tcm-GHSA-IFNα2b小鼠体内分布

4.2.3 99Tcm-GHSA-IFNα2b大鼠肝显像

4.3实验结果与讨论

4.3.1 99Tcm-GHSA-IFNα2b的制备

4.3.2 99Tcm-GHSA-IFNα2b小鼠体内分布

4.3.3 99Tcm-GHSA-IFNα2b大鼠肝显像

4.4本章小结

第五章论文总结

主要结论

存在的问题与展望

致谢

参考文献

附录： 作者在攻读硕士学位期间发表的论文