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第一章绪论
1.1研究背景
1.1.1葡萄糖异构酶简介
1.1.2高果糖浆研究现状与葡萄糖异构酶在高果糖浆生产中的应用
1.1.3嗜热菌和耐热性葡萄糖异构酶的研究现状
1.1.4影响外源基因在大肠杆菌宿主中表达因素的研究进展
1.2立题背景及意义
1.3课题研究内容
第二章葡萄糖异构酶编码基因xylA的克隆、序列优化与表达
2.1引言
2.2材料与方法
2.2.1菌株与质粒
2.2.2培养基
2.2.3主要试剂
2.2.4主要仪器
2.2.5 T. maritima的培养方法
2.2.6 T. maritima基因组DNA的提取方法
2.2.7电转化感受态细胞的制备
2.2.8引物设计及目的基因PCR方法扩增
2.2.9 pHsh-xylA1的构建、转化及阳性转化子的筛选
2.2.10经过序列优化的表达载体pHsh-xylA2的构建
2.2.11粗酶液的制备及重组酶酶活的测定
2.2.12重组酶蛋白的SDS-PAGE检测
2.2.13菌株质粒稳定性实验
2.3结果与讨论
2.3.1 xylA基因的克隆与pHsh-xylA1的构建
2.3.2 mRNA二级结构的优化以及pHsh-xylA2的构建
2.3.3重组菌株E.coli JM109(pHsh-xylA2)诱导条件的优化
2.3.4突变效果的对比
2.3.5重组质粒pHsh-xylA2的稳定性
2.2本章小结
第三章重组耐热葡萄糖异构酶的纯化与性质
3.1引言
3.2材料与方法
3.2.1菌种与培养基
3.2.2主要试剂及缓冲液
3.2.3主要仪器及其生产厂商
3.2.4重组葡萄糖异构酶的纯化
3.2.5重组葡萄糖异构酶的酶学性质的测定
3.3结果和讨论
3.3.1葡萄糖异构酶的纯化
3.3.2重组葡萄糖异构酶的性质
3.4本章小结
第四章重组菌E. coli JM109(pHsh-xylA2)表达培养
4.1引言
4.2材料和方法
4.2.1菌种
4.2.2培养基
4.2.3试剂
4.2.4主要仪器及其生产厂商
4.2.5种子培养
4.2.6培养基优化
4.2.7发酵罐培养方法
4.2.8葡萄糖浓度的测定
4.2.9菌体浓度和重量
4.3结果与讨论
4.3.1培养基组分对重组菌生长的影响
4.3.2 3.8 L台式发酵罐中重组菌的培养
4.4本章小结
第五章结论
致谢
参考文献
附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文