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第一章 绪论
1.1 固态发酵概述
1.2 固态发酵产酶的研究进展
1.2.1 固态发酵在发酵水平上的研究进展
1.2.2 固态发酵在蛋白质水平上的研究进展
1.3 根霉脂肪酶的固态发酵和分离纯化
1.3.1 根霉脂肪酶概述
1.3.2 根霉脂肪酶的固态发酵
1.3.3 根霉脂肪酶纯化
1.4 固体发酵环境条件对丝状真菌产特殊蛋白质的影响
1.5 本论文的立题意义和主要研究内容
1.5.1 本论文的研究目的和立题意义
1.5.2 本论文的研究思路与主要研究内容
第二章 华根霉固态发酵产全细胞合成活性脂肪酶的培养条件研究
2.1 前言
2.2 材料与方法
2.2.1 菌种
2.2.2 主要试剂
2.2.3 主要仪器
2.2.4 研究方法
2.3 结果与讨论
2.3.1 培养基组分以及培养条件对华根霉菌体结合酯合成脂肪酶发酵的影响
2.3.2 固态发酵产菌体结合酯合成脂肪酶进程
2.4 小结
第三章 华根霉固态发酵酯合成脂肪酶的分离纯化和物理特性
3.1 前言
3.2 材料与方法
3.2.1 菌种
3.2.2 培养基
3.2.3 主要试剂
3.2.4 主要仪器
3.2.5 溶液配制
3.2.6 研究方法
3.2.7 脂肪酶的SDS-PAGE分析
3.2.8 N-末端氨基酸序列的测定
3.2.9 肽质量指纹谱分析
3.3 结果与讨论
3.3.1 华根霉脂肪酶活力分布
3.3.2 Triton X-100浓度对膜结合脂肪酶提取效果的影响
3.3.3 华根霉固态发酵产酯合成脂肪酶的纯化
3.3.4 华根霉液态发酵产酯合成脂肪酶的纯化
3.3.5 脂肪酶N端氨基酸序列分析
3.3.6 肽质量指纹谱分析
3.4 小结
第四章 华根霉固态发酵特征性酯合成脂肪酶的生化性质
4.1 前言
4.2 材料与方法
4.2.1 菌种
4.2.2 培养基
4.2.3 主要试剂
4.2.4 主要仪器
4.2.5 溶液的配制
4.2.6 研究方法
4.2.7 脂肪酶水解活性的研究
4.2.8 脂肪酶合成活性的研究
4.2.9 兔抗菌体蛋白血清的制备
4.2.10 ELISA法检测免疫血清的效价
4.2.11 抗体的纯化
4.2.12 免疫印迹分析
4.3 结果与讨论
4.3.1 纯化的脂肪酶的水解酶学性质
4.3.2 纯化的脂肪酶的合成酶学性质
4.3.3 脂肪酶SSL1、SML1比较
4.3.4 兔抗菌体蛋白血清效价的测定及抗体的纯化
4.3.5 SSL1特征性的验证
4.4 小结
第五章 华根霉固态发酵非特征性酯合成脂肪酶的生化性质
5.1 前言
5.2 材料与方法
5.2.1 菌种
5.2.2 培养基
5.2.3 主要试剂
5.2.4 主要仪器
5.2.5 研究方法
5.2.6 脂肪酶水解活性的研究
5.2.7 脂肪酶合成活性的研究
5.3 结果与讨论
5.3.1 SSL2水解酶学性质
5.3.2 SSL2合成酶学性质
5.3.3 脂肪酶SSL2、SML2比较
5.4 小结
第六章 诱导华根霉固体发酵特征性酯合成脂肪酶表达的关键因素的研究
6.1 前言
6.2 材料与方法
6.2.1 菌种
6.2.2 主要试剂
6.2.3 主要仪器
6.2.4 溶液配制
6.2.5 培养基和培养方法
6.2.6 菌体收集与菌体结合脂肪酶的制备
6.2.7 检测方法
6.2.8 蛋白含量标准曲线的绘制
6.3 结果与讨论
6.3.1 间接Elisa法测定SSL1含量标准曲线的建立
6.3.2 液体发酵中模拟固态发酵条件对诱导SSL1的影响
6.3.3 平板培养中模拟固体发酵条件对诱导SSL1的影响
6.4 小结
主要结论
论文创新点
参考文献
致谢
附录:作者在学期间发表的论文