鼠李糖脂在微乳毛细管电动色谱中的应用

摘要

微乳毛细管电动色谱(MEEKC)是在胶束毛细管电动色谱(MEKC)基础上发展起来的一种电泳新技术。鼠李糖脂是近年来应用较为广泛的生物表面活性剂，表面活性很高。本论文首次将鼠李糖脂应用于MEEKC，旨在解决经典微乳体系中离子型表面活性剂用量过多造成的焦耳热过大、柱效下降、分析时间过长等问题。论文分四个部分:
　　 1.通过发酵法制备鼠李糖脂，经过分离纯化得到鼠李糖脂提取物，通过高效液相色谱-电喷雾质谱法(HPLC-ESI-MS)确定了提取物中鼠李糖脂同系物的组成及相对质量分数。通过临界胶束浓度(CMC)的测定对鼠李糖脂的表面活性做了初步探讨。结果表明，该鼠李糖脂提取物至少由九种同系物组成。在弱碱性条件下(pH7.5-9，0)，pH的变化对鼠李糖脂的表面活性有显著影响。pH小于9.0时，CMC随着pH的升高而降低，在pH9.0处达到最低值；pH大于9.0时，CMC随着pH值的升高而逐渐升高。这是氢键和极性头基间的静电排斥力共同作用的结果。
　　 2.以该鼠李糖脂提取物为表面活性剂制备了微乳液，并探讨了该微乳体系稳定性的影响因素。通过微乳液滴粒径和ζ电位的测定考察了pH值及添加物对该微乳体系微结构的影响。结果显示，该微乳体系稳定性受温度、pH值、表面活性剂浓度和助表面活性剂影响较大。微乳液滴的粒径及ζ电位绝对值都随pH值的升高呈增大趋势，只在pH9.0处例外。少量十二烷基硫酸钠(SDS)的添加使微乳液滴粒径和ζ电位绝对值增大，低浓度正丁醇的加入使微乳液滴粒径增大，而ζ电位绝对值减小。
　　 3.将鼠李糖脂微乳液应用于MEEKC，建立了新型微乳体系，并系统研究了微乳组成对时间窗口的影响。以乙腈为电渗流标记物测定电渗流时间，以强疏水性化合物菲为标记物测定微乳液滴的迁移时间，考察了MEEKC时间窗口的变化。研究表明，pH值、鼠李糖脂浓度、缓冲液浓度、正丁醇的添加均使时间窗口增大。在实际应用工作中可根据需要调节分析窗口，达到良好的分离效果。
　　 4.最后，利用该微乳体系，快速分离了泼尼松，泼尼松龙和氢化可的松，并与经典微乳体系的分离效果做了比较。优化后的微乳体系组成为:001%(W/W)鼠李糖脂-0.8%(W/W)正庚烷-99.1%(W/W)80 mmol/L硼砂缓冲液(pH9.2)。该微乳体系中，pH和缓冲液浓度对分离的选择性起到了重要作用。当分离电压为20 kV，柱温为20℃时，泼尼松、泼尼松龙、氢化可的松在9.6 min内达到了基线分离，三种分析物的迁移时间和峰面积相对标准偏差分别在0.9%和3.0%以内，具有良好的重现性。与经典微乳体系相比，鼠李糖脂微乳体系有效地缩短了分离时间。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章 绪论

1.1 微乳毛细管电动色谱

1.1.1 微乳液简介

1.1.2 MEEKC原理

1.1.3 MEEKC的应用与发展

1.1.4 MEEKC分离影响因素

1.1.5 MEEKC的优缺点

1.2 鼠李糖脂

1.2.1 生物表面活性剂简介

1.2.2 鼠李糖脂结构与性质

1.2.3 鼠李糖脂的应用

1.2.4 鼠李糖脂微乳体系研究现状

1.3 糖皮质激素的分析

1.3.1 糖皮质激素简介

1.3.2 糖皮质激素的滥用与危害

1.3.3 糖皮质激素残留的分析现状

1.4 本课题的目的和意义

第二章 鼠李糖脂的制备与性质

2.1 引言

2.2 实验仪器与试剂

2.2.1 试剂

2.2.2 仪器

2.3 实验方法

2.3.1 鼠李糖脂的生产

2.3.2 鼠李糖脂的提纯

2.3.3 鼠李糖脂同系物的分离与鉴定

2.3.4 鼠李糖脂的定量

2.3.5 鼠李糖脂表面活性测定

2.4 结果与讨论

2.4.1 鼠李糖脂的生产

2.4.2 鼠李糖脂的提纯

2.4.3 鼠李糖脂同系物的分离和鉴定

2.4.4 鼠李糖脂的含量测定

2.4.5 鼠李糖脂的表面活性

2.5 结论

第三章 鼠李糖脂微乳体系稳定性与微结构的研究

3.1 引言

3.2 实验仪器与试剂

3.2.1 试剂

3.2.2 仪器

3.3 实验方法

3.3.1 微乳液制备

3.3.2 微乳液滴微结构考察

3.4 结果与讨论

3.4.1 微乳液制备及稳定性考察

3.4.2 微乳液滴微结构考察

3.5 小结

第四章 MEEKC时间窗口的研究

4.1 引言

4.2 实验仪器与试剂

4.2.1 试剂

4.2.2 仪器

4.3 实验方法

4.3.1 样品溶液配制

4.3.2 微乳液制备

4.3.3 电泳条件

4.4 结果与讨论

4.4.1 缓冲液pH对时间窗口的影响

4.4.2 缓冲液浓度对时间窗口的影响

4.4.3 表面活性剂浓度对时间窗口的影响

4.4.4 助表面活性剂浓度对时间窗口的影响

4.4.5 油相种类和浓度对时间窗口的影响

4.4.6 有机添加剂的影响

4.5 小结

第五章 糖皮质激素的快速分离

5.1 引言

5.2 实验仪器与试剂

5.2.1 试剂

5.2.2 仪器

5.3 实验方法

5.3.1 样品溶液配制

5.3.2 微乳液制备

5.3.3 电泳条件

5.4 实验结果与讨论

5.4.1 MEEKC分离影响因素

5.4.2 与经典微乳体系的比较

5.4.3 重现性考察

5.5 小结

结论与展望

致 谢

参考文献

附录