糖尿病肾病肾小球细胞间相互作用——氧化应激、结缔组织生长因子与系膜细胞

摘要

目的:观察高糖与茶多酚对培养的人肾小球系膜细胞氧化平衡及系膜细胞促硬化因子的表达的影响，探讨糖尿病肾病发生、发展的机制以及茶多酚对糖尿病肾病的防治作用;通过对系膜细胞单独培养、系膜细胞与内皮细胞共培养两种方法的比较，明确在高糖条件下细胞间存在异常的相互作用，并探讨异常相互作用对糖尿病肾病发生、发展的影响。 研究方法:实验采用系膜细胞单独培养、系膜细胞与内皮细胞共培养两种细胞培养方法，分别在对照糖浓度(10mmol·L-1)、高糖浓度(35mmol·L-1)以及抗氧化剂茶多酚干预的条件下培养0、12、24、36、48小时，借助分光光度法、RT-PCR及免疫细胞化学方法分别检测上清液SOD、CAT活性、MDA含量和系膜细胞CTGF与FN的mRNA、蛋白的表达情况。 研究结果:不同糖浓度对系膜细胞增殖的影响：糖浓度低于45mmol·L-1时，对系膜细胞增殖没有明显的影响；糖浓度为55和65mmol·L-1时，系膜细胞增殖受抑制;不同浓度茶多酚对系膜细胞增殖的影响：一定浓度的茶多酚对系膜细胞增殖没有显著影响；而当茶多酚浓度达到60μg·ml-1时，则表现出对系膜细胞增殖的抑制作用;系膜细胞单独培养时，各组培养上清液MDA、SOD与CAT的值随培养时间的延长而升高，同时系膜细胞CTGFmRNA与FNmRNA表达也随时间而升高。高糖促进系膜细胞MDA生成，降低其SOD与CAT的活性，而茶多酚能降低高糖条件下系膜细胞MDA的生成，提高其SOD与CAT的活性。高糖促使培养的系膜细胞CTGF与FN的mRNA、蛋白高表达，茶多酚则能显著干预这一上调作用;系膜细胞与内皮细胞共培养时，各组培养上清液MDA、SOD与CAT值都随培养时间的延长而升高，CTGFmRNA与FNmRNA表达也随时间而升高；共培养时各组培养上清液MDA、SOD、CAT的值高于同时刻系膜细胞单独培养的值(P＜0.05)，在培养12与36小时CTGFmRNA与FNmRNA表达高于同时刻系膜细胞单独培养(P＜0.05);高糖提高共培养上清液中MDA水平，其升高程度明显高于高糖时细胞单独培养，降低SOD与CAT活性，同时上调与内皮细胞共培养的系膜细胞CTGFmRNA与FNmRNA的表达。茶多酚能降低共培养时高糖所致的MDA的升高，提高SOD、CAT活性，抑制系膜细胞CTGFmRNA、FNmRNA的表达。 研究结论:高糖促进系膜细胞活性氧生成增多，抗氧化酶活性下降，导致组织细胞氧化失衡，促进糖尿病肾病病理变化的产生;茶多酚可能通过清除活性氧、提高细胞抗氧化酶活性来调节细胞氧化平衡，延缓糖尿病肾病的进展，对糖尿病肾病起一定的防治作用;高糖条件下系膜细胞与内皮细胞间存在异常的相互作用，这种异常相互作用促进了糖尿病肾病的发生、发展;与系膜细胞单独培养相比，系膜细胞与内皮细胞共培养模型可以更好地反映糖尿病肾病时肾小球内部的病理生理过程。

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文摘

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前言

文献综述

第一部分高糖环境下系膜细胞氧化平衡失调以及茶多酚的干预

一、材料与方法

二、结果

三、讨论

第二部分高糖环境下系膜细胞与内皮细胞间异常相互作用

一、材料与方法

二、结果

三、讨论

论文附图

结论

致谢

参考文献

作者简介