雌激素对破骨细胞基质金属蛋白酶mRNA表达的影响

摘要

目的：本实验通过体外分离培养兔破骨细胞，观察不同浓度及不同时间雌激素对兔破骨细胞基质金属蛋白酶MMP-9mRNA、MMP-8mRNA表达的影响，进一步阐明雌激素对破骨细胞介导的骨质疏松症的作用机制，讨论药物开发和治疗的实验和理论基础。 方法：体外分离培养出生24小时内的新西兰兔破骨细胞，用含有不同浓度17β-雌二醇OM(空白对照)、10-5M、10-6M、10-7M、10-8M、10-9M、10-10M、10-11M、10-12M、10-13M的M199培养液1ml分别作用于破骨细胞，进行药物干预实验，观察不同浓度雌激素及相同浓度雌激素不同时间对破骨细胞活性的影响。同时加入0、10-5～10-13M17β-雌二醇观察其对兔破骨细胞MMP-9mRNA、MMP-8mRNA表达的影响，用Trizol法提取细胞内总mRNA，MMP-9mRNA、MMP-8mRNA表达采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定。 结果：不同浓度17β-雌二醇对破骨细胞的成活有不同程度的抑制，当实验组雌激素浓度为10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L时，对破骨细胞活性的抑制作用与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)，其余剂量虽然有抑制作用，但无统计学意义。 而观察不同浓度雌激素对破骨细胞性骨吸收实验表明，随着雌激素浓度的增加，无论是骨片的骨陷窝数目，还是骨陷窝的面积均有不同程度的抑制。当雌激素浓度分别为10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L时，与对照组相比存在统计学意义(P＜0.05)。接着选择不同时间内观察不同浓度17β-雌二醇OM(空白对照)、10-6M、10-8M、10-10M、10-12M对骨陷窝数目和面积的影响，实验表明尽管随着时间的推移，各个实验组的骨陷窝数目和面积均有不同程度的增加，培养后第六天骨陷窝数目和面积增加最为显著，但与对照组相比，各种浓度的雌激素均存在着不同程度的抑制作用，尤以浓度为10-6M的雌激素的抑制作用最为明显，有统计学意义(P＜0.05)。 为了进一步证实雌激素对破骨细胞性骨吸收的抑制作用的机理，我们还应用RT-PCR方法对培养的兔破骨细胞进行了MMP-9mRNA和MMP-8mRNA表达的检测，发现不同浓度的雌激素对体外培养的兔破骨细胞MMP-9mRNA表达较对照组均有抑制作用。当雌激素浓度为10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L时对MMP-9mRNA的表达有明显抑制作用，与对照组比较有统计学意义(P＜0.05)，说明MMP-9mRNA的表达水平可以随着骨吸收活性的不同而改变。虽然重复试验了3次，但是本实验中所有破骨细胞均未表达MMP-8mRNA。 结论：不同浓度的雌激素呈时间和剂量依赖性地抑制破骨细胞的活性，表现为破骨细胞性骨吸收陷窝的数目和面积的增加受到不同程度的抑制作用。不同浓度的雌激素呈剂量依赖性地下调兔破骨细胞MMP-9mRNA的表达，说明雌激素对兔破骨细胞基质金属蛋白酶表达的调控作用随其浓度变化而不同，这可能是雌激素抑制破骨细胞介导的骨吸收的部分作用机制。

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前言

基质金属蛋白与雌激素在骨质疏松症发病机制中的作用 文献综述

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结果

讨论

结论

致谢

参考文献

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