人源噬菌体抗体库的构建及抗Aβ寡聚体抗体的筛选

摘要

阿尔兹海默氏症是一种神经退行性疾病，其主要病理变化为Aβ形成的神经细胞外的淀粉样斑块和Tau形成的神经元纤维缠结，最近的研究发现由Aβ（1-42）聚合而成的小分子量的Aβ寡聚体可能是Aβ造成神经元损伤的重要原因，在疾病动物模型或AD病人中使用被动免疫治疗可以有效地清除Aβ各级聚合物并达到改善认知功能的作用。但由于异源抗体的AAR（Anti-Antibody Reaction）的存在，制备全人抗体就成了一种重要的解决途径。我们首先在体外合成了Aβ（1-42）寡聚体，同时采集6个AD病人的血液样品，提取总鼢RNA，进行RT-PCR，将免疫球蛋白重，轻链V区和C1区基因扩增出来，克隆入噬菌粒载体中，分别构建了四个次级库和一个同时接有重、轻链基因的Fab库，M13K07超感染后生成Fab型噬菌体抗体库。通过结合-洗脱-扩增过程对Fab型噬菌体抗体库进行筛选。得到可与Aβ寡聚体特异性结合的人源化抗体。为后续研究奠定了基础，希望能为临床诊断及治疗提供帮助。

目录

文摘

英文文摘

声明

绪论

文献综述

第一章 Aβ1—42寡聚体的合成

引言

一、仪器及材料

二、方法

三、结果

四、讨论

第二章 人源噬菌体抗体库的构建

引言

一、仪器及材料

二、方法

三、结果

四、讨论

第三章 人Fab噬菌体抗体库筛选抗Aβ1—42寡聚体抗体

引言

一、仪器及材料

二、方法

三、结果

四、讨论

第四章 噬菌体抗体单克隆化及其DNA序列测定

引言

一、仪器及材料

二、方法

三、结果

四、讨论

结 论

致谢

参考文献

作者简介