JNK在cGVHD狼疮样小鼠肾组织中的表达及氟伐他汀的干预作用

摘要

目的：
　　 (1)观察c-Jun氨基末端激酶(JNK)和磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)在不同时期的cGVHD狼疮样肾炎小鼠肾组织的表达情况，初步探讨JNK是否参与了cGVHD狼疮样肾炎小鼠的发病及病情进展；
　　 (2)用氟伐他汀作为干预因素，研究其是否可通过影响JNK、p-JNK的表达延缓cGVHD狼疮样肾炎小鼠肾脏病变进程，以及不同剂量氟伐他汀对不同时期cGVHD狼疮样肾炎小鼠肾脏病变的疗效差异。
　　 方法：
　　 cGVHD狼疮样小鼠模型参照有关文献建立。按随机设计原则将48只雌性(C57BL/6J×DBA/2)F1代杂交鼠分为模型对照组(A组)、低剂量氟伐他汀干预组(B组5mg/(kg·d))、高剂量氟伐他汀干预组(C组10mg/(kg·d))和正常对照组(D组)，每组12只。A、B、C组小鼠建立cGVHD狼疮样肾炎模型，B、C组小鼠每日氟伐他汀灌胃，A、D组小鼠等体积生理盐水灌胃。自首次注射淋巴细胞第二周开始，每两周收集一次各组小鼠24h尿液，并用双缩脲比色法测定尿蛋白量。第12、16周末分别随机处死各组中的6只小鼠(12周组为1组，16周组为2组，即A、B、C、D组小鼠分为A1、B1、C1、D1和A2、B2、C2、D2组)，留取肾组织标本，采用HE和Masson染色观察肾脏组织病理学变化，并用免疫组织化学及Western blot法检测JNK、p-JNK蛋白定位及定量表达，应用RT-PCR法检测JNK mRNA的表达。
　　 结果：
　　 (1)cGVHD狼疮样肾炎小鼠自造模第4周开始出现尿蛋白，且尿蛋白量逐渐升高，A、B、C三组小鼠各时间点的24h尿蛋白量均显著高于D组小鼠(P＜0.01)，B组及C组小鼠尿蛋白量与A组小鼠相比明显下降(P＜0.01)，C组尿蛋白量与B组比较差异亦有统计学意义(P＜0.05)；A、B、C各组内2组小鼠24小时尿蛋白水平均显著高于1组小鼠(P＜0.01)，D组内1、2组间小鼠24小时尿蛋白水平无统计学差异。
　　 (2)肾组织HE染色显示：A组小鼠系膜区明显增宽，基质大量增生，部分肾小球可见硬化；肾小管萎缩；肾间质炎症细胞浸润；A2组小鼠肾小球硬化及肾间质基质沉积较A1组更为明显；B、C组小鼠上述病变减轻，肾小球细胞增生减轻，肾间质炎症细胞浸润和基质沉积减少；A、B、C各组内2组小鼠病变较1组小鼠加重；D组小鼠肾组织肾小球、肾小管大小、形态正常，未见小管扩张、间质炎性细胞浸润及纤维增生等改变。
　　 (3)Masson染色结果显示：A组小鼠肾小球囊壁及肾小管间质可见明显胶原纤维沉积；B组及C组小鼠胶原纤维较A组减少，主要位于肾小管间质；A、B、C各组内2组小鼠胶原沉积较1组小鼠加重；D组小鼠肾组织未见明显胶原沉积。
　　 (4)A、B、C组小鼠肾组织JNK、p-JNK蛋白表达及p-JNK活化程度(p-JNK/JNK)较D组均明显增强(P＜0.01)，B、C组小鼠肾组织以上蛋白表达及p-JNK活化程度较A组显著降低(P＜0.05)，C组与B组比较降低更为明显(P＜0.05)；A、B、C各组内2组小鼠肾组织以上蛋白表达以及p-JNK活化程度较1组小鼠增加(P＜0.05)。
　　 (5)A、B、C组小鼠肾组织JNK mRNA表达较D组均明显增强(P＜0.01)；B、C组小鼠肾组织JNK mRNA的表达较A组显著降低(P＜0.05)；C组与B组比较其表达降低亦具有统计学意义(P＜0.05)；A、B、C各组内2组小鼠JNK mRNA表达较1组小鼠增加(P＜0.05)。
　　 结论：
　　 (1)JNK、p-JNK在正常肾组织中有少量表达，在cGVHD狼疮样肾炎小鼠肾组织中JNK、p-JNK蛋白及JNK mRNA表达均显著升高，提示JNK可能参与了cGVHD狼疮样肾炎小鼠的发病及进展；
　　 (2)氟伐他汀干预后小鼠肾组织中JNK、p-JNK表达水平下降，可能是其缓解肾脏病变进展的机制之一；
　　 (3)高剂量氟伐他汀(10mg/(kg·d))对LN肾脏病变的缓解作用优于低剂量氟伐他汀(5mg/(kg·d))。

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第一章文献综述

第二章材料与方法

第三章结果

第四章讨 论

结 论

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