小鼠睾丸及不育患者精液中精子细胞的分离与鉴定

摘要

该文分二部分：在第一部分试验中,首先利用连续3次组合酶消化成年小鼠睾丸制备睾丸细胞悬液,然后经6层非连续Percoll梯度离心法（15﹪、22﹪、30﹪、40﹪、50﹪和60﹪）分离,通过形态学和流式细胞术鉴定各个Percoll组分中精子细胞的含量,并以伊红Y排斥试验测定细胞的存活率.在第二部分试验中,利用这种非连续Percoll梯度离心法,对15例各种类型不育患者的精液细胞进行分离,并利用瑞-姬染色法、流式细胞术、免疫细胞化学和荧光原位杂交（FISH）等方法,从细胞形态特征、DNA倍体、细胞表面标记与分化抗原,以及原位杂交信号的数目和位置结合细胞核特有的形态等方面加以鉴定.

目录

引言

第一部分小鼠睾丸精子细胞的分离与鉴定

1材料与方法

1.1实验动物、主要试剂与器材

1.2试剂配制

1.3制备小鼠睾丸细胞悬液

1.4 Percoll梯度分离

1.5细胞密度测定

1.6伊红Y排斥试验

1.7瑞-姬染色

1.8流式细胞术测定

1.9卵胞质内精子细胞显微注射

1.10统计学处理

2结果

2.1组合酶消化结果

2.2 Percoll梯度分离

2.3精子细胞显微注射

3分析与讨论

第二部分不育患者精液中精子细胞的分离与鉴定

1材料与方法

1.1主要试剂与仪器

1.2精液标本

1.3非连续Percoll梯度分离

1.4瑞-姬染色

1.5细胞计数

1.6流式细胞术测定

1.7免疫细胞化学测定

1.8荧光原位杂交(FISH)

1.9统计学分析

2结果

2.1细胞染色

2.2细胞计数

2.3流式细胞术

2.4免疫细胞化学

2.5 FISH

3分析与讨论

小结

参考文献

研究生期间主要学术成果

致谢

综述精子细胞显微注射授精

参考文献