家族性高胆固醇血症病人低密度脂蛋白受体功能的分析及基因突变的检测

摘要

家族性高胆固醇血症（familial hypercholesterolemia,FH）是由低密度脂蛋白（low density lipoprotein,LDL）受体基因缺陷引起的一种常染色体显性遗传疾病.纯合子FH病人中有很多在十几岁到二十几岁时就会发生很严重的心血管事件;杂合子FH病人患心肌梗死的机会较同龄的正常人也高得多.但到目前为止,尚未建立完善的诊断方法.该研究旨在通过LDL受体功能分析及LDL受体基因检测来达到确诊FH的目的.结论 FCM检测外周血淋巴细胞表面LDL受体活性的方法与常规方法相比,具有快速、简便、损伤小等特点,且可以预知大致的基因突变类型.PCR-SSCP分析技术检测灵敏度高,可用于检测单碱基置换、数碱基插入或缺失等基因变异,是检测LDL受体基因突变的有效手段.上述两种方法的合理配置可用于大规模人群筛查,并可能发现地方性常见的LDL受体基因突变类型,从而有助于建立简便的FH基因诊断方法.

目录

摘要

ABSTRACT

第一章引言

1.1.研究背景

1.2.实验目的

第二章材料与方法

2.1.材料

2.1.1.材料及试剂

2.1.2.仪器

2.1.3.特殊试剂及缓冲液配置

2.2.研究对象

2.3.实验方法

2.3.1.脂蛋白的分离与标记

2.3.2.血脂分析

2.3.3.外周血淋巴细胞分离及培养

2.3.4.外周血淋巴细胞LDL受体活性的测定

2.3.5.PCR扩增目的基因片段

2.3.6.单链构象多态性(SSCP)分析

2.3.7.PCR产物测序

第三章结果

3.1.临床资料

3.1.1.5个FH家系调查结果

3.1.2.5个FH家系先证者及主要成员的病史资料

3.1.3.各家系主要成员的临床检查资料

3.2.外周血淋巴细胞LDL受体活性检测

3.2.1.DiI、DiI-LDL标准曲线及LDL的荧光标记率

3.2.2.外周血淋巴细胞LDL受体活性检测结果

3.3.LDL受体基因突变检测

3.3.1.家系D的LDL受体基因突变检测结果

3.3.2.家系E的LDL受体基因突变检测结果

第四章讨论

4.1.LDL受体功能检测

4.2.LDL受体基因突变检测

第五章小结

致谢

参考文献

综述1

综述2