低氧环境和血管内皮生长因子-165对人胃癌细胞侵袭转移的影响

摘要

目的：研究低氧环境和血管内皮生长因子-165(VEGF165)对人胃癌细胞中MMP-2及uPA mRNA和蛋白表达的影响，以研究VEGF165对肿瘤侵袭转移的影响及其作用机制。本实验以腺病毒为载体，将VEGF165转染至人胃癌细胞株BGC-823后，用低氧诱导剂氯化钴诱导产生低氧环境，观察转染了VEGF165的人胃癌细胞在低氧环境下侵袭能力的改变，并检测细胞MMP-2及uPA表达的变化，从而在分子水平初步探讨低氧环境和VEGF165因子对人胃癌细胞MMP-2和uPA mRNA、蛋白量表达以及对细胞侵袭能力的影响及其机制。
　　方法：利用腺病毒作为载体将已构建成功的、含VEGF165/GFP基因的重组腺病毒(Ad-VEGF165/GFP)瞬时转染人胃癌细胞株BGC-823，利用低氧诱导剂氯化钻进行低氧干预模拟低氧环境。实验分组：以VEGF165基因瞬时转染后的人胃癌细胞株BGC-823再行低氧诱导剂干预的细胞作为低氧转染一组，以GFP基因瞬时转染后的人胃癌细胞株BGC-823再行低氧诱导剂干预的细胞作为低氧转染二组，以单纯转染VEGF165基因的胃癌细胞为单纯转染一组，以单纯转染GFP基因的胃癌细胞为单纯转染二组，以单纯低氧诱导剂氯化钴干预的胃癌细胞为单纯低氧组，以未转染未低氧干预的正常胃癌细胞作为空白对照组，采用Transwell小室行侵袋实验检测六组细胞的侵袭能力。利用半定量RT-PCR和Western blot方法对六组细胞中MMP-2及uPA的mRNA和蛋白表达水平进行分析。
　　结果：Transwell小室结果显示单纯低氧组细胞侵袭能力较空白对照组提高，而低氧转染一组细胞的侵袭转移能力与其他五组比较均明显提高，差异有显著性(P<0.01)，低氧转染二组、单纯低氧组及单纯转染一组相比较无明显差异(P>0.05)，单纯转染二组与空白组比较无明显差异(P>0.05)：RT-PCR结果显示MMP-2及uPA的mRNA的表达在单纯低氧干预组较空白对照组有所上调，差异有显著性(P<0.05)，而低氧转染一组要明显高于其他对照组及空白组(P<0.01)，低氧转染二组、单纯低氧组及单纯转染一组相比较无明显差异(P>0.05)，单纯转染二组与空白组比较无明显差异(P>0.05)：Western blot检测MMP-2及uPA的蛋白量表达显示单纯低氧干预组较空白对照组要明显上调，而低氧转染一组较其他五组表达均明显上调(P<0.01)，低氧转染二组、单纯低氧组及单纯转染一组比较无明显差异(P>0.05)，单纯转染二组与空白组比较无明显差异(P>0.05)。
　　结论：低氧干预和转染VEGF165均能提高人胃癌细胞的侵袭力，而低氧干预Ad-VEGF165转染后的肿瘤细胞其侵袭能力较单纯低氧干预的细胞明显提高，低氧环境下转染VEGF165能够明显提高人胃癌细胞BGC-823中MMP-2及uPA的mRNA及蛋白表达，提示VEGF165在一定低氧条件下可通过上调MMP-2和uPA来促进肿瘤细胞侵袭能力。