联合应用CD40L单克隆抗体和未成熟树突状细胞对小肠移植免疫耐受的实验研究

摘要

目的：研究供体骨髓来源的未成熟树突状细胞(imDC)联合CD40L单克隆抗体(CD40LmAb)诱导同种异体大鼠节段性小肠移植免疫耐受中的作用。 方法：190只SD大鼠施行异位节段性小肠移植，手术显微镜下门静脉-下腔静脉端侧吻合、腹主动脉端侧吻合建立同种异体大鼠节段性小肠移植模型；分离供体大鼠骨髓来源DC细胞前体，经GM-CSF、IL-4体外刺激培养6天后，检测细胞表面共刺激分子及MHC表达，鉴定是否为imDC；实验动物随机分为3组，每组15对，进行不同预处理后进行小肠移植。A阴性对照组，受体不经任何处理，即行小肠移植术；B组：小肠移植前7天，每只受体经阴茎背静脉注射供体的未成熟DC，细胞数为2×106个；C组：小肠移植前7天，每只受体经阴茎背静脉注射供体的未成熟DC，细胞数为2×106个。同时腹腔注射CD40LmAb200ug/只。B、C组1周后行大鼠异位节段性小肠移植术。观察：1、大鼠移植后存活情况；2、移植后3、5、7、14天移植肠病理学情况；3、同时TUNNEL法检测移植肠的细胞凋亡情况。4、移植后3、5、7、14天取受体血清，检测TH1、TH2细胞因子IL-2、IL-10和INF-a的浓度。 结果：采用近交系SD大鼠建立大鼠同种同基因大鼠节段性小肠移植模型，共实施手术95次，50次为预实验，预试验手术成功率54﹪。45次正式实验，正式实验手术成功率为86.7﹪。其中供体平均手术时间(60±10)min，受体平均手术时间为(90±15)min，其中动脉吻合(15±5)min，静脉吻合(8±5)min。移植肠温缺血时间(移植肠脱离低温保存状态至血运恢复的时间)(28±5)min，冷缺血时间控制在30min以内；采用GM-CSF+IL-4培养的骨髓来源的未成熟DC的共刺激分子和MHC表达水平为，与成熟DC差异有显著性；联合应用imDC+CD40LmAb组大鼠小肠移植后存活时间延长，中位生存时间为21天，而单纯小肠移植组中位生存时间仅为7天，有显著统计学意义(P＜0.05)； 联合应用imDC+CD40LmAb组移植小肠和脾脏炎性细胞浸润、黏膜结构破坏程度和黏膜细胞的凋亡数目明显低于imDC组和对照组(P＜0.05)。同时结果发现移植后第3、5、7天imDC+CD40LmAb组大鼠Th1细胞因子IL-2、IFN-r明显降低，而Th2细胞因子IL-10明显升高，与imDC组及对照组比较差异有显著统计学意义(P＜0.05)。 结论：1、改进方法后在显微外科基础上能够建立稳定的大鼠节段性小肠移植模型。2、术前输注供体来源的未成熟DC联合CD40LmAb，可一定程度诱导受体产生免疫耐受，显著延长小肠移植大鼠的存活时间。

目录

略缩词

中文提要

英文提要

第一部分 大鼠节段性小肠移植模型的建立

第二部分 大鼠骨髓来源树突状细胞的培养

第三部分 联合应用未成熟树突状细胞和CD40L单克隆抗体延长大鼠移植肠存活时间

附:在研期间发表论文情况

致谢

小肠移植临床新进展 综述

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