bcl-2基因主要断裂点区mbr在基因表达调控中的作用

摘要

第一部分利用荧光素酶报告基因系统研究bcl-2mbr的调控功能 14号和18号染色体的易位即t(14；18)(q32；q21)是滤泡性淋巴瘤发生的关键步骤。位于bcl-2基因3'端非翻译区(3，-UTR)的bcl-2基因主要断裂点区(mbr)是发生该易位的主要位点。bcl-2mbr在一定的条件下可以形成稳定的“三链”DNA(triplexDNA)结构，而“三链”DNA结构在DNA复制和基因转录活性的调控中具有重要的作用。bcl-2mbr是核基质附着区(MAR)，其3'端的AT丰富区是核基质蛋白SATB1结合所必须。已知SATB1还是重要的转录因子，可调节多个基因的转录活性。以上的研究表明mbr可能在bcl-2基因的表达调控中发挥重要的作用。 为了研究bcl-2基因的mbr序列在调节基因活性中的作用，探讨转录因子SATB1与bcl-2mbr功能之间的关系，我们利用荧光素酶报告基因系统在不同的细胞系中研究bcl-2mbr对其下游报告基因活性的影响以及SATB1与mbr调控功能之间的关系。结果显示mbr可以上调报告基因的表达，去除了SATB1结合位点后的mbr即丧失了其调控基因活性的功能。在细胞中过表达SATB1可以增强mbr上调报告基因活性的作用。 我们的研究结果证实bcl-2mbr具有调节基因活性的功能，并且其功能受到转录因子SATB1的影响。 第二部分利用mbr+/mbr-Nalm-6杂合子细胞系研究bcl-2mbr的调控功能 在第一部分研究中我们通过构建荧光素酶报告基因重组质粒及细胞转染实验初步证明了bcl-2基因的mbr具有调节基因活性的功能，并且其调控功能受到转录因子SATB1的影响。但是bcl-2mbr位于bcl-2基因3'端非翻译区并且距离bcl-2基因启动子约200多kb，在体内它是否能够克服这样长的距离调节bcl-2基因的活性是我们必须回答的问题。为了更进一步探讨bcl-2mbr在bcl-2基因表达调控中的作用，本实验室成功构建了单等位基因mbr序列敲除的mbr+/mbr-Nalm-6杂合子细胞系。在此基础上我们采用荧光定量PCR的方法比较mbr+/mbr-Nalm-6杂合子细胞中bcl-2野生型等位基因与mbr打靶的等位基因之间mRNA水平的差异，以观察mbr在bcl-2基因调控中的作用。同时对定量PCR引物对的扩增效率进行了评价。为了探讨SATB1与mbr功能之间的关系，在SATB1高表达的Jurkat细胞中采用RNA干扰的方法干扰SATB1蛋白表达后检测bcl-2蛋白表达水平。结果显示敲除mbr的bcl-2等位基因mRNA水平与野生型等位基因相比显著下降。Jurkat细胞中干扰SATB1后bcl-2蛋白表达水平明显下降。 我们的研究结果证明bcl-2mbr作为bcl-2基因的一个调控元件可以上调bcl-2基因的表达，并且转录因子SATB1可能通过与mbr相互作用上调bcl-2基因的表达。

目录

第一部分利用荧光素酶报告基因系统研究bcl-2mbr的调控功能

第二部分利用mbr+/mbr-Nalm-6杂合子细胞系研究bcl-2mbr的调控功能

致谢

综述bcl-2基因调控的最新研究进展

鉴定定量PCR不同引物对的扩增效率

The bcl-2 major breakpoint region (mbr) possesses transcriptional regulatory function

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