蝉花子实体的免疫调节作用及其机制

摘要

蝉花(Cordycepsdidadae)是蝉在土壤中的若虫被麦角菌科真菌大蝉草的分生孢子寄生致死的带菌尸体。蝉花含有17种氨基酸、丰富的矿物元素和多种生物活性成分，近年来研究发现蝉花有显著双向免疫调节作用，能选择性杀伤癌细胞，显著抑制肺癌细胞生长等生理学作用。
　　目前，蝉花食用情况、安全性评价尚无较全面的调查和研究报告，对于人工培养蝉花子实体的生理学作用研究较少且分散不成系统，对其生理学作用机制的研究也不深入。鉴于此，本课题进行了我国蝉花主要生长地居民对于蝉花的食用习惯调查，系统地对蝉花子实体的急性毒性、致突变性、生殖毒性、亚慢性毒性做了评价，进而从免疫调节作用方面入手，以小鼠为实验对象，进行了蝉花子实体的免疫调节作用研究并通过小鼠脾淋巴细胞增殖试验、T淋巴细胞亚群分析、NK细胞杀伤活性试验、细胞因子水平检测等方法初步探讨其可能机制。
　　通过本研究，可初步得出以下结果:
　　1.蝉花虽然是一种优质虫草，但居民对其知晓度较低，对其功效了解不够，多数调查者表示愿意尝试蝉花保健品，显示了蝉花具有潜在的广阔市场前景。
　　2.蝉花子实体安全性评价研究中，小鼠急性经口摄入最大耐受剂量为15000mg/kg，毒性分级属无毒级;对标准测试菌TA97、TA98、TA100和TA102均未检出明显的诱变活性;对小鼠骨髓嗜多染红细胞无诱发微核作用;对雄性小鼠未检出精子诱变活性。2000mg/kg、4000mg/kg、8000mg/kg各剂量组大鼠在90d喂养试验中每周体重、总进食量和总食物利用率与对照组值比较，均无显著性差异(P＞0.05);各剂量组雌雄大鼠脏器绝对重量、脏体比与对照组比较无显著性差异（P＞0.05）;雌雄各剂量组的血液学指标检测值、生化指标检测值均在正常波动范围内;各剂量组雌雄大鼠病理组织学检查未显示有不良影响。蝉花子实体90天喂养试验雌雄大鼠实际摄入的最大未观察到有害作用剂量(NOAEL)分别为8583、7027mg/kgb.wt(分别相当于推荐剂量的257和211倍)。
　　3.在蝉花子实体免疫调节作用的研究中，蝉花子实体喂养小鼠45d后可见巨噬细胞吞噬指数提高，脾脏、胸腺指数不同程度增大，DTH反应增强等免疫功能增强表现。另外，高剂量蝉花子实体可引起小鼠血清抗体生成降低，不同剂量组外周血IgG、IgM水平变化不同，提示蝉花子实体对机体体液免疫有调节作用，并且高剂量可能引起免疫抑制。
　　4.在蝉花子实体免疫调节机制研究中，蝉花子实体对经诱导的小鼠脾细胞和非诱导脾细胞都有一定程度的促增殖作用，对外周血淋巴细胞中CD3+、CD8+以及CD4+/CD8+以及细胞因子水平都有一定程度的影响，能提高NK细胞杀伤活性。
　　本课题研究结果表明，人工培养的蝉花子实体作为药食同源真菌，安全无毒，能提高小鼠脾脏、胸腺等免疫器官指数，对机体细胞免疫和体液免疫功能具有一定的调节作用，其调节机制包括调节脾淋巴细胞增殖、影响T淋巴细胞中CD3+、CD4+、CD8+以及CD4+/CD8+比例，影响外周血IL-4等细胞因子水平以及增强NK细胞杀伤活性等。但蝉花的人群知晓度不高，其开发和利用有广阔的潜在市场。

目录

声明

摘要

主要缩略词表

前言

第一章 蝉花食用习惯调查

1 调查问卷的设计与实施

2 结果

3 讨论

第二章 蝉花子实体的安全性评价

第一节 小鼠急性经口毒性试验

1 材料与方法

2 结果

第二节 鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验(Ames试验)

1 材料与方法

2 结果

第三节 小鼠骨髓微核试验

1 材料与方法

2 结果

第四节 小鼠精子畸形试验

1 材料与方法

2 结果

第五节 大鼠90天喂养试验

1 材料与方法

2 结果

第六节 讨论

1 蝉花子实体的毒性分级

2 蝉花子实体的致突变性

3 蝉花子实体的生殖毒性

4 蝉花子实体的亚慢性毒性

第三章 蝉花子实体免疫调节作用的研究

第一节 蝉花子实体对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响

1 材料与方法

2 结果

第二节 蝉花子实体对DNFB诱导的DTH反应的影响

1 材料与方法

2 结果

第三节 蝉花子实体对SRBC诱导的小鼠血清抗体生成的影响

1 材料与方法

2 结果

第四节蝉花子实体体外对小鼠外周血IgG、IgM水平的影响

1 材料与方法

2 结果

第五节 讨论

1 蝉花子实体对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能影响

2 蝉花子实体对小鼠迟发型超敏反应的影响

3 蝉花子实体对小鼠血清抗体生成的影响

4 蝉花子实体对血清中IgG、IgM水平的影响

第四章 蝉花子实体对小鼠免疫调节机制的研究

第一节 蝉花子实体对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响

1 材料与方法

2 结果

第二节 蝉花子实体对小鼠T淋巴细胞亚群的影响

1 材料与方法

2 结果

第三节 蝉花子实体对小鼠血清中IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、INF-γ等细胞因子水平的影响

1．材料与方法

2 结果

第四节 蝉花子实体对小鼠NK细胞杀伤活性的影响

1 材料与方法

2 结果

第五节 讨论

1 蝉花子实体对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响

2 蝉花子实体对小鼠T淋巴细胞亚型及细胞因子的影响

3 蝉花子实体对小鼠NK细胞杀伤活性的影响

总结

参考文献

文献综述 蝉花的药用价值与开发前景

作者简介

致谢