Hrd-1与Derlin-1在胃癌中表达及对葡萄糖转运蛋白GLUT-1表达的影响

摘要

目的:探讨葡萄糖转运蛋白GLUT-1及E3泛素连接酶Hrd-1、逆转运蛋白Derlin-1在胃癌中的表达及意义，及三者之间的相互关系，并进一步探究胃癌中Hrd-1及Derlin-1对于GLUT-1的调控机制。
　　方法:应用免疫组化及免疫印迹方法检测人类胃癌组织和癌旁组织中GLUT-1、Hrd-1、Derlin-1的表达差异。在人类胃癌SGC-7901细胞中分别过表达Derlin-1与GLUT-1、RNAi技术沉默Derlin-1，并应用免疫荧光及免疫印迹法检测蛋白表达水平变化;MTT法检测Derlin-1表达情况对于SGC-7901细胞增殖的影响;使用免疫共沉淀技术检测Derlin-1与GLUT-1结合情况。
　　结果:
　　1.免疫组化及免疫印迹法发现胃癌组织中GLUT-1、Hrd-1、Derlin-1蛋白表达水平均高于癌旁组织;GLUT-1主要表达于细胞膜上及部分胞质内，与胃癌的大小及病理分型相关;Derlin-1及Hrd-1主要表达于细胞质中，Derlin-1表达与胃癌的淋巴结转移相关;GLUT-1在胃癌的表达水平与Hrd-1及Derlin-1的表达水平负相关。
　　2.使用RNAi技术敲降Derlin-1在人胃癌细胞SGC-7901中的表达，MTT结果显示，siRNA介导的Derlin-1表达下调对SGC-7901细胞的增殖无明显影响;同时过表达SGC-7901细胞中的Derlin-1对其增殖亦未见明显影响。
　　3.在SGC-7901细胞中共转染EGFP-myc-GLUT-1质粒和pcDNA3.1-Derlin-1及单独转染EGFP-myc-GLUT-1质粒，转染48小时后提取细胞裂解上清液，进行免疫共沉淀实验，用anti-myc抗体免疫沉淀Derlin-1，随后使用免疫印迹法检测免疫沉淀物发现共转染组和单独转染组均有Derlin-1蛋白条带显示，证明GLUT-1和Derlin-1蛋白存在着相互结合作用。
　　4.在人类胃癌细胞SGC-7901内共转染EGFP-myc-GLUT-1和pcDNA3.1-Derlin-1以及EGFP-myc-GLUT-1和pSilencer-Derlin-1重组载体，同时使用了单独转染EGFP-myc-GLUT-1的以及EGFP-myc-GLUT-1分别与该两种重组载体对应的空白载体共转染的人类胃癌细胞SGC-7901作为对照，转染48小时转染EGFP-myc-GLUT-1和pcDNA3.1-Derlin-1组与共转染EGFP-myc-GLUT-1和对应空载载体组比较，Derlin-1表达明显增高，而GLUT-1表达随之降低;共转染EGFP-myc-GLUT-1和pSilencer-Derlin-1重组载体组与共转染EGFP-myc-GLUT-1和对应空载载体组比较，Derlin-1表达明显降低，而GLUT-1表达随之增高;共转染EGFP-myc-GLUT-1和两种空载质粒的两组与单独转染EGFP-myc-GLUT-1组未见GLUT-1与Derlin-1表达有明显差异。
　　结论:GLUT-1、Derlin-1与Hrd-1与胃癌密切相关;胃癌组织中的GLUT-1表达与Hrd-1、Derlin-1表达呈现相关性;人类胃癌细胞中Derlin-1能够与GLUT-1蛋白相互作用，从而介导GLUT-1蛋白的降解。

目录

声明

摘要

缩略词表

前言

第一章 综述 葡萄糖转运蛋白-1与胃癌的关系

1．葡萄糖转运蛋白分类、结构及主要功能

2．GLUT-1与各类肿瘤的关系

3．GLUT-1与胃癌

4．小结

第二章 材料与方法

1．实验材料

2．实验方法

3．统计学分析

第三章 实验结果

一、GLUT-1、Hrd-1及Derlin-1在人胃癌组织中的表达

二、胃癌细胞中Derlin-1对于GLUT-1表达的影响

第四章 讨论

一、胃癌与GLUT-1

二、Hrd-1、Derlin-1与胃癌的关系

三、Derlin-1、Hrd-1与GLUT-1蛋白之间存在相互作用

四、总结

结论

致谢

参考文献

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