间隙性应用甲状旁腺激素（PTH）对大鼠成骨细胞蛋白谱的影响

摘要

目的：间隙性PTH应用于大鼠和人都可以促进骨形成，但是其作用机理尚未明确。本研究试图通过蛋白质组学方法来比较间隙性PTH刺激组大鼠成骨细胞与对照组大鼠成骨细胞的蛋白质表达谱，初步探讨间隙性PTH应用促成骨的可能机制。 方法：在每个为期24小时的细胞培养周期中，大鼠成骨细胞(ROB)与PTH在前6小时共孵育，后18小时与PTH溶剂共孵育(PTH间隙刺激组)；或整个周期中仅与PTH溶剂共孵育(对照组)。在第3周期的第6小时末(PTH间隙刺激组称Itm6h，对照组称Ctr6h)、24小时末(PTH间隙刺激组为Itm24h，对照组为Ctr24h)分别收集细胞，裂解液溶解细胞蛋白。利用双向电泳方法分离细胞蛋白质，并用ImageMaster图像分析软件比较这二组细胞的蛋白质图谱，随机选择一些差异蛋白质点，应用基质辅助激光解吸离子化-飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定其胶内酶解后的肽质量指纹图谱，通过Mascot软件查询Swiss-prot数据库。 结果：我们获得了重复性好的成骨细胞蛋白质图谱。分析蛋白质图谱发现Itm6h较Ctr6h有7种蛋白表达下调，选取其中5个蛋白质斑点，鉴定结果为：F-actincappingbetasubunit，phenylalanine-tRNAsynthetase-likesubunit，Ppprotein，IL-22R-alpha-2以及一个未知功能蛋白；Itm24h较Ctr24h有14种蛋白表达上调，有5种蛋白表达下调，选取其中14个蛋白质斑点，经鉴定得知在Itm24h中表达上调的蛋白质分别是：beta-actin，Vimentin，GRP78，GrpE-like1，GrpEproteinhomolog1，PDIprecursor,ERP29precursor,GDIalpha，proteinDJ-1，Galactokinase1，IGFBP-3precursor以及一个未知功能蛋白。这些差异表达的蛋白中大多数具有直接或间接调节某些细胞凋亡的功能。 结论：PTH间隙性刺激体外培养成骨细胞后能引起成骨细胞蛋白质表达谱的变化，在PTH撤离后这种作用更明显，提示间隙性PTH刺激对成骨细胞的调节具有“延迟触发效应”。这些蛋白质的差异表达能提供我们对PTH促成骨机制的新认识，将来有必要对这些差异蛋白质应用免疫印迹及免疫组化等方法进一步验证。

目录

摘要

引言

第一章材料和方法

第二章结果

第三章讨论

第四章小结

参考文献

致谢

甲状旁腺激素对成骨细胞作用的研究进展

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