睾丸去神经支配对雄性生殖细胞的影响及其机制

摘要

目的： 研究睾丸支配神经(精索神经)在睾丸组织内的分布特征及去神经支配后对雄性生殖细胞凋亡与分化的影响，以及对性激素分泌的影响。 方法 1)免疫组织化学ABC法，以特异性的抗体标记人睾丸组织内蛋白基因产物9.5(PGP9.5)、C末端神经多肽Y(CPON)、神经肽Y(NPY)和血管活性肠肽(VIP)等肽能神经，了解其在人睾丸组织内的分布特点2)通过显微外科技术，同时切除SD大鼠(300-350g)精索上神经和精索下神经，分别于1、4、8天采取睾丸组织，采用脱氧核搪核酸末端转移酶介导的dUTP的缺口末端标记技术(TUNEL)观察精原细胞和Leydig细胞的凋亡情况。 3)切除精索神经对性激素的影响，解剖显微镜下建立睾丸去神经支配大鼠模型，分别于术前7天、术后1、7、14、21天和术后28天进行麻醉下大鼠眼眶后静脉丛处取血，放射性免疫的方法检测血清中睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、泌乳素(PRL)扣雌二醇(E2)的浓度.了解性激素分泌的变化. 4)以EDS建立Leydig细胞特异性敲除模型，不同剂量EDS腹腔内注射给药，注射后3天、7、14天处死大鼠，取出睾丸组织，行HE染色光镜下组织学观察和P450sce免疫组化观察及灰度分析。观察Leydig细胞特异性敲除情况。 结果： 1)PGP9.5肽能神经和CPON肽能神经主要分布在睾丸间质内，与曲细小管相邻，CPON阳性纤维尚见于血管周围，其分布密度低于PGP9.5；NPY肽能神经在人睾丸实质内主要见于睾丸血管周围；Ⅷ肽能神经在睾丸实质内未见分布。 2)术后1、4、8天，精原细胞和间质细胞均发生显著凋亡。其中精原细胞的凋亡峰值出现在术后第一天，间质细胞的凋亡在这3个时点没有明显差异. 3)血清中睾酮测定：去精索神经组术后睾酮持续下降，与手术前相比差异有显著性(p<0.05)，去精索上下神经组较去精索上神经组和去精索下神经组睾酮下降更为明显，于28天时有显著差异性(P<0.05)；血清中的黄体生成素测定：去精索神经组术后黄体生成素持续上升，与手术前相比差异有显著性(P<0.05)，去精索上下神经组较去精索上神经组和去精索下神经组上升更为明显，于28天时有显著差异性(P<0.05)；血清中的卵泡刺激素测定：均于手术后1天迅速升高(P<0.05)，此后逐渐降低至手术前的水平；血清中泌乳素测定：去精索神经各组血清中泌乳素于手术后逐渐升高，术后28天达最高，其中去精索下神经组术后21天和术后28天与术前比差异有显著性(P<0.05)，去精索上神经组术后14天、术后21天和术后28天与术前比差异有显著性(P<0.05)，去精索上下神经组术后1天、术后7天、术后14天、术后21天和术后28天与术前比差异有显著性(P<0.05)；血清中雌二醇测定：去精索神经各组血清中雌二醇均于术后1天急剧下降并于术后14天降至最低(P<0.05)，而后稍有回升并保持稳定，但是仍低于手术前(P<0.05)。 4)EDS处理3天后，均观察到Leydig细胞的减少，其中40mg/kg剂量组的减少程度不明显；EDS处理后7天，曲细精管内生精细胞出现排列紊乱的现象，以90mmg/kg剂量组更为明显；EDS处理后14天，60mg/kg剂量组出现一种核圆形、核染色淡、体积较大的新形成Leydig细胞，而在75mg/kg剂量组没有发现此细胞。P450scc免疫组化与光镜结果一致.灰度分析结果显示，EDS处理后3天及7天，各剂量组与正常对照相比差异均有显著性(P<0.05)；60mg/kg剂量组14天与3天，7天相比差异有显著性(P<0.05)，且与正常对照差异无显著性(P>0.05)。 结论 1)人睾丸间质内分布着PGP9.5、 CPON和NPY肽能神经纤维，为精索神经参与精子发生过程提供形态学基础。 2)在睾丸去神经早期阶段，精原细胞和间质细胞即有大量凋亡，这可能是去神经支配后期睾丸组织发生病理改变的重要原因。 3)睾丸去精索神经支配对大鼠性激素的产生有明显的影响，精索神经对精子的发生具有重要的调控作用。 4)EDS确实能特异性地敲除成年大鼠Leydig细胞，60mg/kg的剂量可以更好的模拟青春期Leydig细胞增殖分化过程。

目录

论文说明：中英文缩写对照表

声明

前言

第一部分 PGP9.5、CPON、NPY和VIP肽能神经在人睾丸组织中的分布

第二部分 睾丸去神经支配诱发SD大鼠精原细胞和间质细胞凋亡

第三部分 睾丸去精索神经支配对大鼠性激素的影响

第四部分 对不剂量EDS的Leydig细胞特异性杀伤效应的观察

小结

致谢

文献综述 生精细胞凋亡及其调控