共培养体系内老化髓核细胞对正常髓核细胞致退变效应

摘要

目的:观察老化髓核细胞旁分泌作用于正常髓核细胞后的致退变效应。
　　方法:通过对人正常NPCs细胞系(Scien Cell4800)体外二维培养、细胞间融合达80％后1∶2分瓶传代至P12或100μmol/L双氧水作用于P1代2h，构建NPCs复制性老化及应激诱导的过早老化模型。将老化NPCs与人正常NPCs按2∶1、2∶2、1∶2细胞数目比例分别分层接种于Transwell小室与6孔板中共培养，同时将人正常NPCs单独接种于6孔板。分别于第3、7、10天，观察正常NPCs形态及老化率、凋亡率及G0/G1期细胞比例等细胞活力指标的变化，并通过real-time PCR与Western-blot方法分别检测Aggrecan、Ⅱ型胶原的基因表达与蛋白合成水平。对数据经过适当方法统计分析得到结果。
　　结果:与单独培养于6孔板中人正常NPCs相比，共培养组的正常NPCs的形态出现类似细胞老化的表现，老化率、凋亡率及G0/G1期细胞比例等细胞活力指标升高，Aggrecan、Ⅱ型胶原表达合成水平下调，这些现象在应激性老化模型共培养体系中较复制性老化模型体系显著(P＜0.05);相同体系内，随着共培养时间的延长及接种老化NPCs所占比例的升高而明显(P＜0.05);相同检测方法中Aggrecan表达合成水平下调较Ⅱ型胶原更显著(P＜0.05)。
　　结论:通过体外二维培养正常NPCs、细胞间融合达80％后1∶2分瓶传代至P12或100μmol/L双氧水作用于P1代NPCs2h可以分别建立符合要求的人NPCs复制性老化及应激诱导的过早老化模型。共培养体系中正常NPCs细胞活力及Aggrecan、Ⅱ型胶原表达与合成水平较对照组较低，老化模型NPCs对正常NPCs细胞表型与活力表现出致退变效应。老化模型NPCs致退变效应与老化模型类型、老化与正常NPCs接种比例、共培养时间有关。

目录

声明

摘要

中英文缩写词表

前言

退变椎间盘细胞细胞因子分泌的改变及其影响(文献综述)

第一章 实验材料和方法步骤

1．1 技术路线

1．2 器材、试剂与实验对象、时间地点

1．3 实验的方法步骤

1．4 统计学分析

第二章 实验结果与统计分析

2．1 老化NPCs模型的建立与评估

2．2 老化髓核细胞致退变效应的研究

第三章 讨论

3．1 椎间盘退变概述

3．2 椎间盘细胞老化

3．3 非细胞间直接接触共培养体系的建立

3．4 共培养体系内老化NPCs细胞因子分泌的改变及影响

3．5 实验设计的优势与不足

第四章 结论

致谢

参考文献

作者简介