硝苯地平对牙龈成纤维细胞Ⅰ型胶原合成的影响

摘要

硝苯地平(Nifedipine，NIF)属于二氢吡啶类钙通道阻滞剂，临床上用于冠心病、高血压的治疗。自1984年第一例临床报道服用NIF并发牙龈增生以来，国内外学者普遍观察到牙龈增生(gingival overgrowch，GO)为该药在口腔的重要的副作用。其病理特点表现为纤维组织增生并伴有不同程度炎性细胞浸润。许多学者在细胞水平和分子水平方面致力于对发病机制的研究，但目前发病机制仍不清楚。本研究通过体外原代培养正常的牙龈成纤维细胞(gingival fibroblast，GF)、NIF易感性和非易感性牙龈组织的成纤维细胞。通过细胞记数和噻唑蓝(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide，MTT)法观察细胞增殖情况，酶联免疫吸附分析(enzyme-1inked immunosorbent assay,ELISA)检测胶原表达的情况，初步探讨NIF诱导牙龈增生的可能机理. 第一部分:牙龈成纤维细胞原代培养 【材料和方法】取阻生第三磨牙拔牙志愿者的健康牙龈组织，服用NIF导致牙龈增生患者的牙龈组织和服用NIF未表现牙龈增生患者的牙龈组织。通过组织块法体外原代培养成纤维细胞，第5～8代用于后续实验。 【结论】细胞培养是后续实验的基础，无菌规范的操作是原代培养成功率的保证。组织块原代培养GF是传统经典的培养方法，操作中的细节需要认真对待。 第二部分:硝苯地平对牙龈成纤维细胞胶原表和细胞增殖的影响 【材料和方法】适量NIF粉、无水乙醇和DMEM配置终浓度为108μg/L、360μg/L、1200μg/L的NIF液，无水乙醇的终浓度为0.01％。实验中使用健康GF。实验分组，第1组：含NIF 108μg/L；第2组：含NIF 360μg/L；第3组：含NIF 1200μg/L；第4组：空白对照，仅为标准培养液。分别于加药后1天、3天、5天，细胞计数观察细胞增殖，ELISA检测胶原表达情况。 【结论】体外研究表明1200μg/L、360μg/L浓度NIF比低浓度NIF有促进健康人GF Ⅰ型胶原表达和细胞增殖的作用，胶原表达增加和细胞增殖提高可能和药物性牙龈增生的机制有关。 第三部分:硝苯地平性牙龈增生组织中成纤维细胞增殖和胶原分泌 【材料和方法】适量NIF粉、无水乙醇和DMEM配置终浓度为1μmol/L NIF液，无水乙醇的终浓度为0.01％。使用NIF易感性和非易感性牙龈组织的成纤维细胞。实验中细胞分为4组，分别为：GF-1、GF-2、GF-3、GF-4，其中GF-1、-2为NIF非易感性牙龈组织的成纤维细胞，GF-3、-4为NIF易感性牙龈组织中成纤维细胞。细胞接种于24孔板，于含1 μmol/L NIF的DMEM中培养，分别于第1、3、5天后MTT比色法检测细胞增殖，ELISA检测胶原表达情况。 【结论】体外实验结果显示NIF易感性牙龈组织和NIF非易感性牙龈组织在细胞增殖和胶原表达方面存在明显的差异。NIF易感性牙龈组织细胞增殖明显，同时胶原表达增加。这可能和NIF性药物牙龈增生的机制有关。

目录

论文说明：术语及缩略语表

声明

前 言

第一部分 牙龈成纤维细胞原代培养

第二部分 硝苯地平对牙龈成纤维细胞胶原表达和细胞增殖的影响

第三部分　硝苯地平性牙龈增生组织中成纤维细胞增殖和胶原分泌

小 结

参考文献

个人简历

学习成绩

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致 谢

细胞因子与药物性牙龈增生