胰腺星状细胞的分离、培养、鉴定及其早期活化机制的实验研究

摘要

目的：通过腹主动脉插管灌注胶原酶消化分离胰腺星状细胞(pancreatic stellate cell，PSC)，建立简单易行的PSC分离方法，并对PSC进行培养和鉴定；初步探讨PSC早期活化的机制。 方法：大鼠腹主动脉插管灌注后，经胶原酶消化、Nycodenz密度梯度离心，分离得到PSC；通过观察细胞形态、胞质内脂滴和免疫细胞化学方法检测结蛋白(desmin)、神经胶质酸纤维蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)、α平滑肌肌动素(α-smooth muscle actin，α-SMA)的表达来鉴定PSC；RT-PCR方法方法及WestBlot方法测定PSC中Smad2/3表达。 结果：腹主动脉灌注法分离得到PSC，产率、活力和纯度分别为：15.3±4.6×103/g体重、95.0±3.5％、>80％；培养24后大多数细胞已贴壁，呈星状或多角形，48h后表达desmin、GFAP，并在96h后表达α-SMA；Smad2/3在PSC早期活化中显著高表达，48H后达其高峰。 结论：通过腹主动脉灌注法较容易分离得PSC，其产率、活力和纯度较高，经鉴定后能够满足体外实验要求；Smad2/3的高表达是PSC早期活化过程中的中心环节。Smad2/3的高表达与Smad7无法抑制其活化从而造成两者失去平衡是引起PSC活化的主要原因。

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附录：综述 TGF-β在慢性胰腺炎纤维化过程中的调控作用