炎症介导的CXCL16/CXCR6途径激活在脂质肝损伤中的作用研究

摘要

目的：肝脏是脂代谢的核心器官，脂代谢紊乱在肝损伤中扮演重要作用。非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)是一种常见的、病理上以肝细胞内脂质沉积及炎症为主要特点的疾病，目前被认为是代谢综合征在肝脏的主要表现。本研究旨在探讨微炎症状态下细胞因子(C-X-C motif)配体16(CXC ligand16，CXCL16)及其受体CXC受体6(CXC chemokine receptor6，CXCR6)在NAFLD发生、发展中的作用及机制。
　　方法：研究分为体内、体外两部分。将8周龄雄性载脂蛋白E基因敲除(apolipoprotein E knockout，ApoE KO)小鼠随机分为对照组，高脂组，高脂+炎症组。8周后处死小鼠，收集血浆标本及肝脏组织。体外研究，应用胆固醇(cholesterol，CHO)、白介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)或CXCL16siRNA干预人肝细胞株(Humanhepatoblastoma cell line，HepG2)。采用化学酶法及ELISA法分别检测脂质谱及炎症因子水平，苏木精-伊红染色(Hematoxylin-eosin staining，HE)、油红O染色及Filipin染色观察胞内脂质积聚情况。免疫组化、免疫荧光染色、Real-time PCR及Western Blot法检测组织及细胞内炎症因子、CXCL16/CXCR6信号通路相关蛋白以及胞外基质(extracellular matrix，ECM)的表达情况，并采用流式细胞仪法对活性氧簇(reactiveoxygen species，ROS)进行定量测定。
　　结果：与高脂组相比，高脂+炎症组血清中炎症因子血清淀粉样蛋白A(serumamyloid proteinA，SAA)、肝细胞内肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TNF-α)及单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein1，MCP-1)表达明显增加，提示微炎症动物模型构建成功，且高脂+炎症组除HDL外，其他脂质成分显著降低。进一步研究显示，炎症显著增加肝细胞内脂质沉积及上调CXCL16/CXCR6信号通路相关蛋白的表达，并伴有胞外基质及氧化产物ROS的合成增加。有趣的是，体外应用CXCL16siRNA基因沉默HepG2细胞CXCL16的表达，则脂质沉积、胞外基质以及ROS的含量明显减少。
　　结论：本研究证实，炎症可能通过激活CXCL16/CXCR6信号途径诱导胞内脂质沉积，进而增加胞外基质分泌以及ROS产生，加速NAFLD的进展。

目录

声明

摘要

缩略语注释表(Abbreviations)

前言

文献综述

CXCL16与脂质肝损伤

炎症加速脂代谢紊乱介导的肝脏损伤

材料与方法

1 材料

2 实验方法

结果

第一部分 体内研究

第二部分 体外研究

讨论

结论

参考文献

致谢

作者简介