miR--154通过调控CCND2影响前列腺癌细胞的增殖能力

摘要

目的: MicroRNAs(miRNAs)是一类长约20～22个核苷酸的非编码单链RNA分子，可通过与其相关的mRNA分子3'端非编码区(untranslated region，UTR)互补配对，参与基因表达的转录后调控。大量证据证明miRNA在肿瘤的发展，分化，凋亡及增殖过程中发挥着关键作用。在前列腺癌中，miR-154的表达及具体功能目前研究甚少，本课题拟验证miR-154在前列腺癌中的表达趋势及研究其对前列腺癌细胞生物学功能的影响。 材料和方法:采用qRT-PCR方法检测27例前列腺癌组织和9例前列腺正常组织的样本中miR-154的表达水平。运用细胞增殖实验、集落形成实验、细胞周期实验及Western blot分析评估miR-154和CCND2的表达变化对前列腺细胞系PC-3和DU145的影响。通过双荧光素酶报告基因实验确定miR-154是否通过CCND2的3'-UTR区域调控CCND2。 结果:与癌旁前列腺正常组织相比，miR-154在前列腺癌组织中的表达水平明显下调。而与Gleason评分、T分级相关无明显相关性。体外实验中（CCK-8、集落形成实验、细胞周期分析）上调miR-154的表达水平和下调CCND2表达水平可以明显抑制前列腺癌细胞的增殖能力。这种关系表明，在肿瘤的发生发展过程中miR-154与CCND2起协同作用。双荧光素酶报告实验证明CCND2为miR-154直接调控的靶基因。转染miR-154 mimics后72小时后，细胞内CCND2蛋白表达水平显著降低。 结论:在前列腺癌中miR-154可作为一种肿瘤抑制因子，直接在转录后水平调控CCND2的表达。上调miR-154或下调CCND2的表达水平均可影响前列腺癌细胞的迁移和侵袭能力。miR-154有希望成为诊断和治疗前列腺癌的分子标记和靶点。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

1 临床标本收集及处理

2 细胞株

3 主要实验试剂

4 仪器及实验器皿

5 引物

6 研究方法

7 qRT-PCR

8 总蛋白提取

9 BCA法总蛋白定量

10 Western blotting

11 流式细胞仪检测

12 荧光素酶报告基因实验

统计学方法

结果

1 miR-154在癌组织中的表达是下调的

2 miR-154抑制前列腺癌细胞株的增殖能力

3．miR-154抑制CCND2表达

4．转染si-CCND2对细胞CCND2表达水平的影响

5 CCND2下调对前列腺癌细胞株增殖功能的影响

6 CCND2是miR-154的直接调控的靶基因

分析与讨论

1．在前列腺癌组织中miR-154表达下调

2．miR-154抑制前列腺癌细胞的增殖、影响细胞周期进展

3．CCND2为miR-154直接靶基因，下调CCND2抑制前列腺癌细胞增殖、阻滞细胞周期进展

参考文献

综述 MicroRNA在前列腺癌中的研究进展

附录 论文主要缩略语中英文对照

攻读学位期间发表论文情况

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