小鼠皮肤特异性敲除Ppp2ca基因对毛发生长的影响

摘要

背景和目的:蛋白质的磷酸化与去磷酸化在细胞的生命活动中起着重要的作用。蛋白磷酸酶2A(PP2A)是生物体内主要的丝/苏氨酸磷酸酶，参与了细胞代谢、DNA复制、细胞周期和细胞分化等生命活动。研究显示，PP2A也参与了皮肤细胞的增殖分化和创伤愈合。本研究拟通过在皮肤角质细胞中特异性敲除PP2A蛋白C亚基（Ppp2ca）基因构建小鼠模型，探索Ppp2ca在小鼠皮肤生长发育中的作用。 方法:将Kre14-Cre转基因工具鼠和Ppp2ca条件型敲除小鼠通过两代的交配，得到从胚胎期14.5天开始在角质细胞中缺失Ppp2ca基因的小鼠。通过对不同时期小鼠皮肤组织的Western、皮肤组织切片、免疫组化等实验，分析缺失Ppp2ca对小鼠皮肤生长发育的影响。 结果:首先获得了基因型为Ppp2caflox/flox; Krt14-Cre的小鼠，并通过皮肤基因组PCR鉴定及Western Blotting等方法验证了Ppp2ca基因在这种突变小鼠皮肤组织中的表达降低。在皮肤角质形成细胞中特异性敲除Ppp2ca，敲除鼠体重明显变小、毛发稀少并且脚掌出现色素沉着，30％敲除鼠在出生后6W内死亡;对出生后P5(follicular morphogenesis)、P11(anagen)、P17(catagen)、P24(telogen)以及P32(anagen)天小鼠皮肤组织进行形态学观察发现，敲除鼠在出生后第一个毛发生长周期毛囊形态发育异常，毛囊排列紊乱，不能正常下沉到脂肪细胞层，导致毛发生长受阻滞。皮肤毛囊分化标志性蛋白AE13与AE15在敲除鼠中表达下降，表明敲除鼠毛干皮层角蛋白表达量减少，毛囊髓质和IRS层的毛透明蛋白表达减少，提示毛囊分化异常。 结论:本研究证实了在皮肤角质形成细胞中敲除Ppp2ca基因会导致小鼠发育受阻，体型变小，脚掌出现色素沉着，皮肤毛囊分化发育异常及小鼠皮肤毛发稀疏。推测Ppp2ca参与了皮肤毛囊分化信号通路，是皮肤生发所需基因。

目录

声明

摘要

引言

材料与方法

1、材料

2、实验方法

实验结果

1、在皮肤中特异性敲除Ppp2ca基因

2、实验小鼠Ppp2ca基因敲除情况鉴定

3、Ppp2ca的缺失对小鼠生长发育的影响

4、Ppp2ca的缺失扰乱了小鼠皮肤毛囊生长周期

5、Ppp2ca的缺失严重影响小鼠皮质和毛干的分化

6、Ppp2ca缺失的小鼠皮肤细胞凋亡信号没有显著改变

讨论

结论

参考文献

文献综述 丝苏氨酸磷酸酶PP2A对皮肤毛囊分化的影响

攻读学位期间发表文章情况

致谢