纳米抗体用于亲和纯化传统抗体的研究

摘要

高纯度的IgG抗体在生物学检测、临床诊断和疾病治疗上有着广泛的应用，IgG抗体纯化的常用方法包括沉淀法和亲和层析色谱法。目前，利用ProteinA/G对抗体的Fc片段的特异性结合，通过亲和层析进行抗体纯化，是实验室和工业上应用最广泛的方法。然而，ProteinA/G对抗体结合的亲和力和特异性尚有改善的余地。本研究基于抗原/抗体结合的高亲和力和高特异性，用人源抗体的Fc片段免疫动物，构建了驼源重链抗体可变区的噬菌体展示文库，利用噬菌体展示技术筛选出了针对人源抗体Fc片段高亲和力、高特异性的纳米抗体。将筛选出的纳米抗体进行大量表达和纯化，然后将其交联至琼脂糖基质上，用于抗体的亲和纯化。结果显示:与Protein A/G相比，anti-Fc纳米抗体具有更高的特异性，能够获得纯度更高的抗体。此外，本研究所获得的anti-Fc纳米抗体也可用于亲和纯化偶联抗体Fc片段的融合蛋白，这为此类的蛋白表达纯化提供了新的途径。

目录

声明

摘要

前言

第一章 文献综述

1．1 抗体的分离纯化

1．1．1．沉淀法

1．2．1．色谱法

1．2 抗体技术及VHH纳米抗体概述

1．2．1．抗体技术发展概况

1．2．2．基因工程抗体

1．2．3．VHH纳米抗体

第二章 实验材料与方法

2．1．实验试剂和仪器

2．1．1．试剂

2．1．2．仪器

2．2．试验方法

2．2．1．动物免疫及免疫后血清分析

2．2．2．淋巴细胞的分离和RNA的提取

2．2．3．噬菌体展示纳米抗体文库的构建

2．2．4．噬菌体展示纳米抗体文库的筛选

2．2．5．纳米抗体的筛选

2．2．6．对获取抗人源抗体Fc片段纳米抗体功能分析

第三章 实验结果与分析

3．1．免疫后动物血清分析

3．2．噬菌体展示纳米抗体文库的构建

3．2．1．从获取的cDNA中扩增出免疫球蛋白的重链可变区

3．2．2．噬菌体载体的酶切

3．2．3．噬菌体展示纳米抗体文库有效插入率和多样性的检测

3．3．针对人源抗体Fc片段纳米抗体的筛选

3．3．1．噬菌体展示纳米抗体文库的筛选

3．3．2．针对人源抗体Fc片段的特异性阳性克隆的筛选

3．3．3．针对人源抗体Fc片段的纳米抗体的诱导表达

3．3．4．诱导表达后纳米抗体的功能检测

3．3．5．利用人源抗体Fc片段的纳米抗体亲和层析纯化血清中的抗体

3．3．6．偶联人源抗体Fc片段的纳米抗体亲和层析柱回收率的分析

结论

讨论

参考文献

致谢

作者简介