GIT1通过Notch信号通路促进骨髓细胞向破骨细胞分化的研究

摘要

目的:研究G蛋白偶联受体激酶结合蛋白1(GIT1)是否通过Notch信号通路影响骨髓细胞向破骨细胞分化。
　　方法:取8周龄GIT1野生型(GIT1+/+)和GIT1基因敲除型(GIT1-/-)小鼠各8只，分离培养小鼠骨髓细胞并向破骨细胞诱导分化。分别在诱导后的4、7d，检测细胞中抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)活性。在诱导后4、7d，用Real-time RT-PCR方法检测破骨细胞相关基因组织蛋白酶K(CTSK)、降钙素受体(CTR)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达。在诱导后的4、7d，用Real-time RT-PCR方法检测Notch信号通路受体、配体和目的基因的表达。
　　结果:在GIT1野生型组和GIT1基因敲除组的小鼠骨髓细胞向破骨细胞诱导分化过程中，基因敲除组中破骨细胞的大小、数量、密度均低于野生型组。基因敲除组中破骨细胞相关基因组织蛋白酶K(CTSK)、降钙素受体(CTR)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达均明显低于野生型组，差异具有统计学意义(P＜0.05)。基因敲除组中Notch信号通路配体Jagged1、受体Notch2和目的基因Hes1的表达明显高于野生型组，差异具有统计学意义(P＜0.05)。
　　结论:GIT1缺失可能通过上调Notch信号通路的表达来抑制骨髓细胞向破骨细胞分化。

目录

声明

缩写词

摘要

前言

材料与方法

1．实验动物饲养和繁殖

2．小鼠基因型鉴定

3．骨组织的固定、脱钙、脱水、包埋、切片

4．HE染色

5．骨髓细胞的分离和诱导培养

6．TRAP染色

7．RNA提取和实时荧光定量RT-PCR实验

8．统计分析

结果

讨论

小结

参考文献

综述 GIT1和Notch在骨折愈合过程中的作用

攻读硕士学位期间发表的论文

致谢