血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)在晚期糖基化终产物(AGEs)促进动脉粥样硬化形成中的作用

摘要

第一部分、晚期糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞LOX-1表达的影响及其机制
　　目的：探讨晚期糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)和细胞间粘附分子(ICAM-1)表达的影响，以及马来酸罗格列酮和LOX-1反义寡核苷酸对上述效应的干预作用，从而揭示LOX-1在AGEs促进动脉粥样硬化形成中的作用和可能机制。
　　方法：以D-葡萄糖和牛血清白蛋白(BSA)在体外37℃条件下孵育制备AGEs。用胶原酶消化法分离HUVECs并加以培养、传代。分光光度法检测HUVECs上清液SOD、MDA含量;不同浓度、不同时间的AGE-BSA干预HUVECs，以及不同浓度的马来酸罗格列酮、LOX-1反义寡核苷酸和AGE-BSA共同干预HUVECs，逆转录聚合酶链式反应方法检测LOX-1以及ICAM-1的mRNA表达;蛋白免疫印迹方法检测LOX-1以及ICAM-1的蛋白表达;用密度梯度加粘附法分离人外周血单核细胞(PBMCs)，按Esposito's法进行HUVECs-PBMCs粘附试验，并根据 Chen氏法计算HUVECs-PBMCs的粘附率。
　　结果：各组培养上清液MDA、SOD的值随培养时间的延长而升高，AGE-BSA促进HUVECs的MDA生成，降低其SOD的活性(P＜0.05);HUVECs中的LOX-1的mRNA和蛋白表达量随着AGE-BSA的浓度和时间增加而增加(P＜0.05);马来酸罗格列酮、LOX-1反义寡核苷酸分别与AGE-BSA共同干预HUVECs呈浓度依赖性抑制LOX-1的mRNA表达和蛋白表达(P＜0.05);马来酸罗格列酮、LOX-1反义寡核苷酸分别与AGE-BSA共同干预HUVECs降低ICAM-1表达的同时也降低了HUVECs-PBMCs粘附率。
　　结论：AGE-BSA促进HUVECs活性氧生成，抗氧化酶活性下降，导致组织细胞氧化失衡;AGE-BSA以时间、浓度依赖方式增加HUVECs的LOX-1mRNA及蛋白表达水平，表明LOX-1在AGEs促进动脉粥样硬化形成中的发挥作用，其可能机制与氧化应激和促进细胞间粘附分子表达和HUVECs-PBMCs的粘附有关;马来酸罗格列酮能部分抑制AGE-BSA诱导的HUVEC sLOX-1和ICAM-1的表达提示其降血糖以外的抗动脉粥样硬化作用。
　　第二部分、晚期糖基化终产物对高脂饮食兔主动脉LOX-1表达的影响及药物的干预作用
　　目的：观察晚期糖基化终产物(AGE)对高脂饮食兔主动脉LOX-1表达的影响以及马来酸罗格列酮和瑞舒伐他汀的干预作用，探讨AGE促进动脉粥样硬化形成的途径以及药物抗动脉粥样硬化的作用机制。
　　方法：采用新西兰白兔42只，随机分为六组，每组7只:A组:喂饲普通饲料;B组:喂饲高脂饲料;C组:喂饲高脂饲料加静脉注射AGE修饰的兔血清白蛋白(AGE-RSA，5mg/kg，1次/隔日);D组:喂饲高脂饲料加静脉注射未加修饰的兔血清白蛋白(RSA，5mg/kg，1次/隔日);E组:喂饲高脂饲料加静脉注射AGE修饰的兔血清白蛋白(AGE-RSA，5mg/kg，1次/隔日)，同时给予马来酸罗格列酮0.5mg/(kg·d); F组:喂饲高脂饲料加静脉注射AGE修饰的兔血清白蛋白(AGE-RSA，5mg/kg，1次/隔日)，同时给予瑞舒伐他汀1.5mg/(kg·d)，共干预10周。10周后取腹主动脉行油红O大体标本染色，HE染色观察光镜下血管形态和结构的变化，免疫组织化学染色法检测动脉血管中LOX-1表达情况，留取血清检测血脂及超敏C反应蛋白，West Blot法检测动脉血管组织NF-κB p65蛋白含量变化情况。
　　结果：
　　1、油红O大体标本染色和HE染色结果显示:与A组比较，B组动脉粥样硬化斑块面积和厚度显著增加（P均＜0.01）;与B组和D组比较，C组动脉粥样硬化斑块面积和厚度显著增加（P均＜0.05）;与C组比较，E组和F组分别给予马来酸罗格列酮和瑞舒伐他汀治疗后斑块面积和厚度均下降(P＜0.05);而E组与F组之间无显著差异(P＞0.05)。
　　2、免疫组织化学染色显示:A组血管组织中未见明显LOX-1阳性细胞;B组和D组LOX-1阳性细胞增加（P均＜0.01）;与B组和D组比较，C组血管组织中LOX-1阳性细胞计数明显增加（P均＜0.01）;E组与F组分别给予马来酸罗格列酮和瑞舒伐他汀治疗后，与C组相比LOX-1阳性细胞明显降低（P均＜0.05）;但E组与F组比较无显著差异。
　　3、血清检测结果显示:与A比较，B组、C组和D组血清CHO、LDL-C明显增高(P＜0.01)，C与D组比较无显著差异(P＞0.05)。与C比较，瑞舒伐他汀治疗后，F组血清CHO、LDL-C下降(P＜0.05);E组经马来酸罗格列酮治疗后，CHO、LDL-C水平未见变化(P＞0.05)。与A组比较，B组、C组和D组TRG有增高趋势，但未达到统计学差异(P＞0.05)。与C组比较，瑞舒伐他汀治疗后F组TRG有下降趋势，但未达到统计学差异(P＞0.05)。血清hs-CRP测定结果显示:B组和D组比较，C组hs-CRP明显增高(P＜0.01);与C组比较，E组与F组分别给予马来酸罗格列酮和瑞舒伐他汀治疗后hs-CRP明显下降（P＜0.01），E组与F组比较无显著差异(P＞0.05)。
　　4、血管组织细胞核内NF-κB p65蛋白含量的变化:与B组和D组比较，C组血管组织细胞核内NF-κB p65蛋白含量显著增高(P＜0.01);E组与F组分别给予马来酸罗格列酮和瑞舒伐他汀治疗后，血管组织细胞核内NF-κBp65蛋白含量显著降低(P＜0.05)，E组与F组比较无显著差异(P＞0.05)。
　　结论：晚期糖基化终产物(AGEs)增加了高脂饮食兔主动脉粥样硬化斑块面积和动脉内膜厚度，促进了动脉粥样硬化的形成，也促进了主动脉LOX-1表达的增加，提示LOX-1可能在AGE促进动脉粥样硬化形成过程中发挥作用。其机制与增加血管炎症反应有关。马来酸罗格列酮和瑞舒伐他汀均能减轻主动脉粥样硬化斑块面积和动脉内膜厚度，减少血管组织细胞核内NF-κB和主动脉LOX-1的表达，降低血清hs-CRP水平，表明马来酸罗格列酮和瑞舒伐他汀可能通过抑制血管炎症反应，减少血管组织细胞核内NF-κB和主动脉LOX-1的表达，发挥抗动脉粥样硬化的作用。
　　第三部分、sLOX-1及hs-CRP在急性冠脉综合征中的意义及药物的干预作用
　　一、sLOX-1及hs-CRP在急性冠脉综合征患者中的检测意义
　　目的：观察不同类型冠心病患者血清水溶性血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(sLOX-1)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平的变化及其之间的关系，探讨临床预测急性冠脉综合征(ACS)的血清学指标。
　　方法：采用酶联免疫吸附法测定62例冠心病患者[ACS34例、稳定型心绞痛(SAP)28例]、27例非冠心病患者血清sLOX-1、hs-CRP水平。
　　结果：ACS患者外周血清sLOX-1、hs-CRP水平均高于SAP(P＜0.05)和非冠心病患者(P＜0.01); SAP患者外周血清sLOX-1、hs-CRP水平高于非冠心病患者(P＜0.05)。线性相关分析:ACS患者血清hs-CRP与sLOX-1的浓度呈正相关(r=0.927，P＜0.001)。
　　结论：ACS患者外周血清sLOX-1、hs-CRP水平升高，二者可作为急性冠脉综合征患者动脉粥样硬化斑块不稳定的血清学指标。
　　二、PCI术前负荷量瑞舒伐他汀治疗对ACS患者 sLOX-1、hs-CRP及心功能和近期预后的影响
　　目的：探讨PCI术前负荷剂量瑞舒伐他汀对非ST段抬高急性冠状动脉综合征(NSTEACS)患者血清sLOX-1、hs-CRP及心功能和近期预后的影响。
　　方法：将72例NSTEACS患者随机分为负荷治疗组(33例)和对照组(39例)，负荷治疗组PCI术前12h顿服瑞舒伐他汀20mg，PCI术前2h追加瑞舒伐他汀20mg。所有患者于术前、术后24h、术后30d抽取静脉血，检测sLOX-1、hs-CRP、CK-MB、cTnⅠ等。两组患者于术前及术后30d通过超声心动图观察左室射血分数(LVEF)的变化。随访30d观察主要不良心脏事件发生率。
　　结果：与术前比较，2组患者PCI术后24h血清hs-CRP、sLOX-1均明显升高（P＜0.05），心肌损伤标准物CK-MB、cTnⅠ亦明显升高(P＜0.01);但负荷治疗组hs-CRP、sLOX-1、CK-MB、cTnⅠ升高水平显著低于标准治疗组(P＜0.05);术后30d负荷治疗组血清hs-CRP、sLOX-1仍低于标准治疗组(P＜0.05)。与术前比较，2组患者血清总胆固醇(TC)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平在术后24h均未见明显变化(P＞0.05)，术后30d出现显著下降(P＜0.05)，但两组之间比较未见显著性差异。与术前比较，2组患者PCI术后24h及术后30d血清ALT及Scr水平均未见明显升高。与对照组比较，负荷治疗组在术后30d左室射血分数(LVEF)显著提高;负荷治疗组主要不良心脏事件总发生率较标准治疗组降低(6.06％ vs23.08％ P＜0.05)。
　　结论：NSTEACS患者PCI术前负荷剂量瑞舒伐他汀能明显减少PCI术后sLOX-1水平，减轻患者的心肌损伤及炎性反应，降低PCI术后近期不良心脏事件的发生，其独立于他汀类药物调脂作用以外，并且使用是安全的。

目录

声明

摘要

缩略词表

绪言

文献综述 血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1研究进展

第一部分 晚期糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞LOX-1表达的影响及其机制

一、材料和方法

二、结果

三、讨论

第一部分结论

第二部分 糖基化终产物对高脂饮食兔主动脉LOX-1表达的影响及药物的干预作用

一、材料和方法

二、结果

三、讨论

第二部分结论

第三部分 sLOx-1及hs-CRP在急性冠脉综合征中的意义及药物的干预作用

一、sLOX-1及hs-CRP在急性冠脉综合征患者中的检测意义

1 资料与方法

2 结果

3 讨论

二、PCI术前负荷量瑞舒伐他汀治疗对ACS患者sLOX-1、hs-CRP及心功能和近期预后的影响

1 资料与方法

2 结果

3 讨论

第三部分结论

全文总结

参考文献

致谢

作者简介