成人T细胞急性淋巴细胞白血病预后分子标记PHF6和DNM2特征研究

摘要

本文通过以下几个部分展开论述：
　　第一部分 PHF6在成人T细胞性急性淋巴细胞白血病中的特征研究
　　目的:T细胞祖细胞在转化过程中出现多种基因的异常改变，这些异常基因协同作用即导致T细胞性急性淋巴细胞白血病(T-cell acute lymphoblastic leukemia，T-ALL)的产生。PHF6(plant homeodomain finger6)是近期研究发现的关键性肿瘤抑制基因，且在T-ALL疾病中存在突变。本研究目的在于研究成人T-ALL中PHF6基因突变、表达及临床意义。
　　方法:本研究通过对成人T-ALL患者的PHF6基因外显子(exon)2-10进行扩增、克隆和测序，研究PHF6突变的发生率、突变位点和类型。通过实时荧光定量PCR检测T-ALL患者PHF6 mRNA的表达水平。分析PHF6突变及表达异常与NOTCH1突变的相关性及预后意义。统计学分析采用SPSS20.0软件，白细胞(white blood cell，WBC)、血红蛋白(hemoglobin，Hb)、血小板(platelet，PLT)、乳酸脱氢酶(1actic dehydrogenase，LDH)等计量资料的差异采用非参数Mann-Whitney检验;计数资料采用X2检验（或Fisher精确检验）;Kaplan-Meier检验方法建立生存曲线，并对不同分组进行总生存(overall survival，OS)时间和无事件生存(event-free survival，EFS)时间的生存分析。P＜0.05认为结果具有统计学意义。
　　结果:本研究成人T-ALL患者中，PHF6基因突变率为27.1％(16/59)，其中包括10例新发现的突变，其中6例为框移突变(6/16，37.5％)，可导致PHF6功能的丧失。此外，本研究发现在T-ALL患者中PHF6 mRNA表达水平显著降低。重要的是，本研究发现PHF6突变与高龄、血红蛋白浓度降低、CD13阳性表达、脾肿大或淋巴结肿大具有显著相关性。另外，PHF6突变与NOTCH1突变具有显著相关性，同时具有这两种突变的T-ALL患者的EFS时间显著减少。结论:在T-ALL中PHF6基因由于低表达或突变导致失活。PHF6突变可以与NOTCH1突变共存，且具有这两种突变的患者有着更差的预后。在T-ALL患者中，PHF6突变与NOTCH1突变的协同致癌因素可能是一种潜在的预后标志。
　　第二部分 DNM2在成人T细胞性急性淋巴细胞白血病中的突变研究
　　目的:DNM2(dynamin2)基因是一种转录因子，参与多种细胞功能，如胞吞，吞噬体形成，细胞内运输，与肌动蛋白和微管网相互作用，以及促进细胞凋亡等。本研究目的在于研究成人T细胞性急性淋巴细胞白血病(T-cell acutelymphoblastic leukemia，T-ALL)中DNM2基因突变。
　　方法:本研究通过对成人T-ALL患者的DNM2基因外显子(exon)2-10、12-14和16-22进行扩增和测序，研究DNM2突变的发生率、突变位点和类型，分析DNM2突变与NOTCH1和PHF6突变的相关性。统计学分析采用SPSS20.0软件，白细胞(white blood cell，WBC)、血红蛋白(hemoglobin，Hb)、血小板(platelet，PLT)等计量资料的差异采用非参数Mann-Whitney检验;计数资料采用X2检验（或Fisher精确检验）。P＜0.05认为结果具有统计学意义。
　　结果:本研究成人T-ALL患者中，DNM2基因突变率为9.52％(4/42)，4例突变均为点突变(R361X，Y485H，G537S和R601W)，其中2例位于MID域，2例位于PH域。4例DNM2突变患者均存在NOTCH1突变，这4例NOTCH1突变发生于HD-N、HD-C及PEST域;其中3例合并存在PHF6突变，3例PHF6突变发生于exon4、5、8。另外，本研究发现DNM2有同义氨基酸突变，发生于exon4(1/42,2.38％)、exon6(1/42,2.38％)、exon22(1/42,2.38％)，特别在exon20有着高发生率(35/42，83.33％)，且exon20存在2种同义氨基酸突变(Ala713A1a和Asp720Asp)，其中A713A的突变率为73.81％(31/42)，并且此突变也发生于B细胞性急性淋巴细胞白血病(B-cell acute lymphoblastic leukemia，B-ALL)及健康人中，突变率均在80％以上。
　　结论:DNM2突变与NOTCH1突变及PHF6突变有着共存现象，可能在T-ALL的发生发展中有着重要作用。

目录

声明

摘要

第一部分 PHF6在成人T细胞性急性淋巴细胞白血病中的特征研究

1 前言

2 材料与方法

2．1 主要试剂和耗材

2．2 主要仪器和设备

2．3 研究对象

2．4 标本采集及单个核细胞的收集

2．5 细胞总DNA的提取

2．6 细胞总RNA的提取和cDNA的制备

2．7 免疫表型及细胞遗传学检测

2．8 基因组PCR及测序

2．9 实时荧光定量PCR

2．10 统计学分析

3 结果

3．1 PHF6在T-ALL中的突变特征

3．2 PHF6基因在T-ALL患者中的表达及与突变的关联

3．3 PHF6突变与临床指标的相关性

3．4 PHF6突变与其它基因突变在T-ALL中的关联性

3．5 PHF6突变与NOTCH1突变共表达与临床指标的相关性

3．6 PHF6突变与临床预后的相关性

4 讨论

参考文献

第二部分 DNM2在成人T细胞性急性淋巴细胞白血病中的突变研究

1 前言

2 材料与方法

2．1 主要试剂和耗材

2．2 主要仪器和设备

2．3 研究对象

2．4 标本采集及单个核细胞的收集

2．5 细胞总DNA的提取

2．6 免疫表型及细胞遗传学检测

2．7 基因组PCR及测序

2．8 统计学分析

3 结果

3．1 DNM2在T-ALL中的突变特征

3．2 DNM2基因同义氨基酸突变

3．3 DNM2突变合并存在NOTCH1、PHF6突变

3．4 DNM2突变与临床指标的相关性

4 讨论

参考文献

综述 PHF6基因结构、基因突变及蛋白功能的研究分析

附录

在读期间发表的论文

致谢