替莫唑胺化疗联合PD1抗体免疫治疗小鼠原位胶质瘤模型的实验研究

摘要

目的:胶质瘤是成人最常见的和最具侵袭性的原发性恶性脑内肿瘤，替莫唑胺是FDA批准的一线化疗药物。免疫治疗是目前除了手术、放疗及化疗的一种新的治疗方式，其中PD1及其配体PD-L1在肿瘤免疫抑制中起重要作用。PDL1表达于多种肿瘤细胞的表面，包括胶质瘤，且肿瘤中高表达的PDL1与肿瘤的免疫抑制和临床预后密切相关。本实验探索替莫唑胺化疗联合PD1抗体免疫治疗在小鼠原位胶瘤模型中的治疗效果。
　　方法:将小鼠胶质瘤细胞株GL261立体定向移植到C57BL/6小鼠的大脑皮层内建立小鼠原位胶质瘤模型，按随机区组设计法随机分为四组:对照组;单用PD1抗体组;单用替莫唑胺治疗组;替莫唑胺联合PD1抗体组。PD1单抗治疗剂量为200ug/次，TMZ治疗剂量为50ug/kg，联合治疗组给予上述等量的PD1单抗及TMZ治疗，对照组腹腔注射等量无菌生理盐水。使用7.0T MRI及免疫组织化学评估各组小鼠建模治疗后肿瘤大小改变情况，免疫组织化学评估脑肿瘤局部和脾脏内CD4+、CD8+T免疫细胞浸润情况，免疫印迹评估PDL1表达及分光光度法评估细胞凋亡，同时察各组小鼠总的生存期。
　　结果:替莫唑胺联合PD1抗体治疗较单一治疗组明显提高了原位小鼠胶质瘤模型的生存期(x2=32.043,P＜0.01);联合治疗后肿瘤病灶面积明显减小（联治组0.69±0.11mm2，对照组11.40±2.36mm2，F=42.771，P＜0.01）;联合治疗后小鼠脑肿瘤局部浸润的CD4+T细胞和CD8+T细胞较对照组也明显升高（联治组CD4+、CD8+T细胞数分别为533±87.68个/mm2、273±14.14个/mm2，对照组分别为133.5±28.99个/mm2、41.5±12.02个/mm2;CD4+T细胞F=45.67，P＜0.01;CD8+T细胞F=5.75，P＜0.01）。
　　结论:PD1抗体联合替莫唑胺治疗能明显提高原位小鼠胶质瘤模型的生存期，为临床胶质瘤病人化疗联合免疫疗提供了有效的临床前依据。

目录

声明

摘要

专用术语注释表

前言

恶性胶质瘤的免疫治疗：PD-1及PD-L1通路阻滞剂

1．前言

2．恶性胶质瘤

3．PD1及其配体PD-L1的表达

4．在人恶性胶质瘤中PD1和PD-L1的表达及与预后的相关性

5．抗PD-1及抗PD-L1免疫治疗的机制

7．抗PD-1／PD-L1抗体联合其他治疗在恶性胶质瘤上的应用

7．1 不同的免疫检查点阻滞剂联用

7．2 免疫检查点阻滞剂与传统治疗联用

7．3 免疫检查点阻滞剂与其他免疫治疗联用

8．展望

9．总结

第一章 材料和方法

1．材料

1．1 细胞株

1．2 主要试剂和材料

1．3 主要仪器

1．4 实验动物

2 实验方法

2．1 GL261细胞的复苏、培养、传代、冻存与计数

2．2 药物的制备

2．3 小鼠原位胶质瘤模型的构建

2．4 细胞及组织免疫印迹实验

2．5 免疫组织化学

2．6 Caspase 3活化程度检测

2．7 统计学方法

第二章 实验结果

3．2 替莫唑胺化疗联合抗PD1抗体免疫治疗小鼠原位胶质瘤模型具有协同治疗的抗癌效果

3．3．联合治疗增加了肿瘤病灶中浸润的CD4+及CD8+T细胞数量

3．4 Caspase-3的活化程度检测

3．5．免疫印迹法评估各组间小鼠脑肿瘤组织PDL1表达情况

第三章 讨论

第四章 结论

参考文献

作者简介

致谢