血清miRNA作为辅助诊断男性肺鳞癌患者标志物的研究

摘要

目的:肺癌是全球发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一。其中，肺鳞癌约占30％，且在男性中高发。目前临床上缺乏有效地早期诊断肺鳞癌的手段，导致大多数患者就诊时已失去手术机会，预后不佳。本研究通过对中国男性肺鳞癌患者的血清miRNA表达进行系统性分析，从而寻求血清miRNA作为非侵入型分子标志物用于诊断肺鳞癌的可能性。
　　方法:运用Exiqon miRNA qPCR panel，初筛得到一组在肺鳞癌患者和正常对照血清pool样本中差异表达的miRNAs。接下来，逐步通过训练集、测试集以及验证集，运用实时聚合酶链式反应(qRT-PCR)对选取的miRNA进行筛选、验证。最后，进一步探究所得到的miRNAs在肺部良性肿瘤患者血清、肺鳞癌患者组织、动脉血清和血清外泌体中是否存在差异表达。
　　结果:在初筛阶段，共得到38个在男性肺鳞癌患者和正常对照样本血清中差异表达的miRNAs。通过多阶段的的独立验证试验，最终得到了一组3个miRNAs:miR-106a-5p，miR-20a-5p和miR-93-5p在男性肺鳞癌患者血清中持续高表达，并可作为分子标签有效地区分肺鳞癌患者和正常人群。通过受试者工作特征曲线(ROC)分析得出，该分子标签在训练集、测试集以及验证集所对应的曲线下面积(AUC)分别为0.969，0.881和0.954。该分子标签也能很好地分辨肺鳞癌患者和肺部良性肿瘤患者(AUC=0.900)。另外，相比于正常对照人群，在肺鳞癌患者的组织和血清外泌体中，这3个miRNAs也一致高表达，差异具有统计学意义。然而，这3个miRNAs在肺鳞癌患者和正常对照样本动脉血清中的差异表达并无统计学意义。
　　结论:本研究发现了一组3个miRNAs(miR-106a-5p，miR-20a-5p和miR-93-5p)在男性肺鳞癌患者血清中高表达，并可作为潜在的辅助诊断肺鳞癌的新型分子标志物。这些发现有可能将来在临床上用于对肺鳞癌患者的初筛，并利于改善肺鳞癌患者的预后。然而在能够利用这一有力工具之前，关于这些miRNAs参与肺鳞癌发生发展的具体机制还需进一步探索。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

1．材料

2．实验方法

结果

1．实验流程和样本信息

2．内参基因的选取

3．肺鳞癌患者和正常对照静脉血清pool样本中的miRNA差异表达谱

4．肺鳞癌患者和正常对照静脉血清差异表达的miRNA分析

5．获得的3个miRNAs在肺鳞癌中潜在的诊断价值

6．获得的3个miRNAs在组织中的表达情况

7．获得的3个miRNAs在血清外泌体中的表达情况

8．候选miRNA在肺鳞癌患者动静脉血中的表达对比

9．获得的3个miRNAs生物信息学分析

讨论

小结

参考文献

综述 MicroRNA作为肺癌生物学标志物的研究进展

攻读学位期间主要发表文章情况

中英文缩略词表

致谢