Rap1b对鼠前成骨细胞(Mc3T3-E1)成骨分化早期的影响

摘要

目的：Rap1b是一种Ras样GTP酶，可参与氧化应激，通过调控多种信号通路如MAPK、B-Raf/MEK/ERK和Akt信号通路调节细胞的增殖和存活，在增殖、分化、形态形成及凋亡中起分子开关的作用，还能调控肿瘤细胞的增殖和转移。还有研究表明Rap1b可以促进内皮迁移与血管生成，以及可以选择性地抑制成熟破骨细胞，进而阻断病理性骨吸收。另外，本课题组在前期研究中发现，Rap1b还参与斑马鱼早期胚胎发育。然而，Rap1b基因对成骨分化过程的调节作用，尚无明确的文献报导。因此，了解Rap1b的生物学功能具有重要意义。MC3T3-E1细胞是从新生C57BL/6小鼠颅顶骨中分离得到的一种前成骨细胞，已被证实其具有成骨细胞的表型分化特征。因此，本研究以鼠前成骨细胞(Mc3T3E1)为研究对象，探讨Rap1b对鼠前成骨(Mc3T3E1)细胞成骨分化早期的影响，在进一步阐明其在成骨分化中的调节作用的理论基础的研究中有重要意义。
　　方法：利用成骨诱导液诱导Mc3T3E1成骨向分化，利用实时定量PCR分别检测诱导后0、3、7d的Rap1 bmRNA的相对表达量。同时向实验组细胞分别转染Rap1b-mus-462和Rap1b-mus-703，4d后进行ALP染色，同时测定Rap1b的mRNA相对表达量，并对转染后细胞中成骨指标ALP、Runx2和Osterix0、3、7d时的mRNA相对表达量进行测定。再利用划痕实验观察siRNA转染对Mc3T3E1细胞迁移能力的影响。
　　结果：Real-time PCR结果显示在成骨诱导早期的不同时间点，Rap1b的表达量随诱导时间的增加而增加。当Rap1b的表达降低时，各成骨指标ALP、Runx2和Osterix的表达量也随之降低，Mc3T3E1细胞迁移能力也有所减弱。
　　结论：Rap1b对Mc3T3E1细胞成骨分化早期以及细胞迁移有一定的促进作用。

目录

声明

英文缩略词表

摘要

前言

1 材料与方法

1．1 主要材料、试剂及仪器

1．2 方法

1．3 统计学分析

2 结果

2．3 siRNA转染后ALP染色结果及成骨诱导不同时间点ALP、Runx2和Osterix的相对表达量

2．4 两组细胞划痕实验结果

3 讨论

3．1 MC3T3-E1细胞特性

3．2 成骨诱导液的成分及作用

3．3 siRNA的作用原理与使用意义

3．4 Rap1b及各成骨指标表达量变化的意义

4 结论

参考文献

文献综述 Rap1b生物学功能研究进展

攻读学位期间发表文章情况

附录

致谢