抗体-纳米颗粒偶联物AntI-HER2/Nab-paclitaxel的构建及其对HER2阳性胃癌的抗肿瘤作用及机制研究

摘要

目的:本研究旨在探讨由抗HER2单克隆抗体(Anti-HER2 monoclonal antibody)和白蛋白紫杉醇(Nab-paclitaxel，Abraxane(@))构建的抗体-纳米颗粒偶联(ANC，Anti-H/Nab-P)治疗人表皮生长因子受体2(HER2)阳性胃癌的疗效及在HER2阳性胃癌移植瘤模型中的体内靶向分布能力，并初步探讨其抗肿瘤机制。
　　方法:将抗HER2单克隆抗体和白蛋白紫杉醇通过EDC/NHS行一步法偶联，获得一种新型的抗体-纳米颗粒偶联物(Anti-H/Nab-P)及纳米药物传输系统，并通过透射电镜(TEM)和动态光散射(DLS)进行检测Anti-H/Nab-P的形态及粒径分布。设立Anti-H/Nab-P、Nab-paclitaxel、paclitaxel(PTX)及PBS空白对照组作用于HER2阳性的胃癌NCI-N87细胞。利用CCK-8法检测不同组别的肿瘤细胞存活率、流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期分布、DAPI染色观察细胞核形态、免疫蛋白印记(Western blot，WB)检测凋亡相关蛋白的表达变化。构建NCI-N87裸鼠皮下移植瘤模型，观察Anti-H/Nab-P、Nab-paclitaxel、paclitaxel(PTX)及PBS空白对照组治疗后肿瘤大小变化及裸鼠体重变化情况，并在实验结束后处死裸鼠，取各组的重要器官及肿瘤组织进行H-E染色观察。将Nab-paclitaxel和Anti-H/Nab-P与NIR-797P染料进行物理吸附，利用小动物活体成像仪实时观察两组不同药物在裸鼠体内的分布情况。
　　结果:TEM结果显示Anti-H/Nab-P抗体纳米颗粒偶联物形态呈均一球形;DLS结果表明Anti-H/Nab-P多分散指数是0.09±0.018(n=3)，平均直径为(139.18±32.06) nm。PTX组、Nab-paclitaxel组、Anti-H/Nab-P组的半数抑制浓度(IC50)分别是(0.24±0.08)μg/ml、(0.13±0.03)μg/ml和(0.048±0.01)μg/ml，提示Anti-H/Nab-P对NCI-N87细胞杀伤作用具有良好的抗肿瘤作用。与PTX组相比，Nab-paclitaxel组和Anti-H/Nab-P组能显著诱导G2/M期阻滞;且Anti-H/Nab-P组诱导G2/M期阻滞能力更强。WB显示，与阴性对照组相比，CLV-caspase-3，CLV-caspase-8，CLV-caspase-9，Survivin和Bax蛋白在PTX组、Nab-paclitaxel组和Anti-H/Nab-P组中表达上调，而Survivin和Bcl-2蛋白表达下调，并且在Anti-H/Nab-P组中CLV-caspase和Bax蛋白表达最强，Survivin和Bcl-2蛋白表达最弱。体内结果表明，Anti-H/Nab-P组、Nab-paclitaxel组、PTX组、PBS组治疗4周后的小鼠肿瘤体积分别为(233±24) mm3、(559±97) mm3、(871±94) mm3和(1576±190) mm3，相对肿瘤体积（RTV）分别为3.72±0.23，8.34±0.51、13.20±1.89、24.28±3.25; Anti-H/Nab-P组肿瘤抑制率达87.88％±3.45％，抑瘤作用最强，病理学检测提示各组之间毒副作用无明显差异。近红外活体成像显示，Anti-H/Nab-P组大量的荧光信号聚集在肿瘤部位，提示Anti-H/Nab-P特异性靶向性能强。
　　结论:抗体-纳米颗粒偶联物Anti-H/Nab-P具有主动靶向性、抗肿瘤能力强的特点，有潜力作为一种新型的药物用于HER2阳性胃癌的治疗。

目录

声明

摘要

主要缩略词表

前言

实验材料和实验方法

1、实验材料

2、抗体-纳米颗粒偶联物Anti-H／Nab-P的合成

3、Anti-H／Nab-P的表征

5、Anti-H／Nab-P对HER2阳性胃癌细胞株NCI-N87的体外抗肿瘤效应研究

6、Anti-H／Nab-P对HER2阳性胃癌细胞株NCI-N87的体内抗肿瘤效应研究

7、统计学分析

实验结果

2、Anti-H／Nab-P对HER2阳性胃癌细胞株NCI-N87的体外试验结果

3、Anti-H／Nab-P对HER2阳性胃癌细胞株NCI-N87的体内试验结果

讨论

结论

参考文献

综述 HER2阳性胃癌靶向治疗的现状及展望

致谢

攻读硕士学位期间发表论文及科研成果

作者简介