基于HER2靶标的抗体偶联药物T-DM1内吞机制研究

摘要

目的:研究抗体偶联药物T-DM1与乳腺癌细胞SKBR3表面人表皮生长因子受体2(HER2)的相互作用及内吞机制.方法:采用基于表面等离子共振(SPR)原理的Biacore方法测试配体T-DM1与受体HER2的相互作用,通过流式细胞仪测定药物在体外内吞清除率,利用激光扫描共聚焦显微镜原位检测药物在细胞中的内吞过程.结果:T-DM1与HER2具有高亲和力,ka为6.234× 106 mol/(L·s),kd为3.077× 10-4/s,KD为4.936×10-11mol/L,流式细胞实验证明受体与配体的结合具有饱和性;利用免疫荧光方法检测到T-DM1在SKBR3细胞内的消除呈时间-剂量依赖关系,实验表明4h内荧光强度减低32％,48 h时降低约90％;共聚焦显微镜实验表明T-DM1先与SKBR3细胞表面的HER2受体结合,进入细胞内,反应1h到达溶酶体,48 h时在显微镜下已消失.结论:T-DM1与HER2具有高亲和力及结合饱和性,在1 h内通过HER2介导内吞进入细胞,随后定位于溶酶体,最后于48 h裂解.