白藜芦醇减轻高磷诱导的离体大鼠主动脉环钙化的研究

摘要

目的： 本研究旨在建立高磷诱导的离体大鼠主动脉环钙化模型及白藜芦醇对血管钙化的保护作用。 方法： 1.Sprague-Dawley(SD)大鼠腹腔注射麻醉，予75%酒精浸泡消毒后转移至超净台下，剖开胸腹腔后取主动脉环，去除血管周围的筋膜，将动脉剪成3-4mm的血管环后转入含Dulbecco’s modified Eagle’s medium(DMEM)液的培养皿中（内含10%FBS、100IU/mL链霉素、100μg/mL青霉素），保存在37℃，含5%CO2的培养箱中，予磷酸二氢钠（NaH2PO4,Pi）和（或）白藜芦醇刺激，隔天换液。 2.应用苏木精-伊红染色法（hematoxylin-eosin staining,H&E）、Von Kossa染色、茜素红染色观察离体主动脉环在不同培养条件下的组织形态学变化。 3.应用ImageJ软件计算主动脉环钙盐染色占比，观察高磷和（或）白藜芦醇干预后钙化情况。 4.应用邻甲酚酞络合酮(ο-cresolphthalein complexone,OCPC)法测定在不同培养条件下的主动脉环钙盐浓度。 5.应用Real-Time PCR技术观察平滑肌细胞标志分子α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin，α-SMA)，Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor2,Runx2)，骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的表达情况。 结果： 1.离体主动脉环培养存活。 2.在高磷刺激下离体主动脉环发生血管钙化，通过设置不同磷浓度，在Pi浓度3.8mmol/l时钙化出现最明显。 3.通过Real-Time PCR测定在高磷刺激下离体主动脉环平滑肌细胞标志分子α-SMA表达下降，骨相关转录因子Runx2、骨相关蛋白OPN表达升高。 4.白藜芦醇能减轻高磷诱导的离体主动脉环钙化。 5.根据Real-Time PCR测定的结果，白藜芦醇能抑制高磷诱导的离体主动脉环平滑肌细胞标志分子α-SMA表达下降，骨相关转录因子Runx2、骨相关蛋白OPN表达升高。