TRIM22通过PI3K/AKT信号通路调控胶质母细胞瘤增殖,侵袭和迁移的研究

摘要

目的： 胶质母细胞瘤是成人中枢神经系统中最普遍，也是恶性程度最高的脑肿瘤。尽管肿瘤手术技术获得了巨大发展，放疗以及替莫唑胺等新型化疗药物的获得了广泛的应用，对于胶质母细胞瘤患者的标准化治疗已经飞速发展，但胶质细胞瘤患者的预后依然不容乐观。因此，进一步深入探索胶质母细胞瘤发生和发展的分子机制，研究新型有效的治疗靶点，对于提高胶质母细胞瘤的治疗效果，改善患者的预后至关重要。 TRIM家族是一类具有RING结构域、B盒和回旋卷曲区等结构的特征性蛋白，其家族成员繁多，在人体内多种生理活动起着不可或缺的重要作用。近些年研究发现，作为TRIM家族的一名重要成员，三结构域蛋白22(tripartite motif-containing22，TRIM22)在肿瘤发生发展中发挥着不可忽视的作用。然而，在胶质母细胞瘤中，TRIM22的表达，功能及临床意义还没有得到相应的研究。TRIM22对于胶质母细胞瘤的具体的主要调控机制仍然还不清楚，亟待深入研究和探索。 ;本实验通过实验探索研究TRIM22对胶质母细胞瘤的增殖及迁移、侵袭能力的影响机制，意图揭示TRIM22在胶质母细胞瘤中的生物学行为及作用。 方法： 1.通过TCGA数据库统计分析比较正常脑组织和胶质母细胞瘤中TRIM22的表达水平。利用qRT-PCR、Western blotting等实验方法检测正常星型胶质细胞与胶质母细胞瘤细胞系U87和U251中TRIM22的mRNA和蛋白表达水平。 2.将两种TRIM22-siRNA分别转染至胶质母细胞瘤细胞系U87和U251细胞中，运用qRT-PCR及Western blotting技术检测两种TRIM22-siRNA在U87和U251细胞中的转染效率。 3.在U87和U251细胞系中分别转染两种TRIM22-siRNA，运用CCK8法测量吸光度以评估细胞活力；运用细胞平板克隆实验观察细胞集落的大小及数量以评估细胞的增值能力。 4.U87和U251细胞系中转染两种TRIM22-siRNA分组，分别用细胞划痕损伤修复实验、体外Transwell实验评估细胞迁移和侵袭能力的变化情况。 5.U87和U251细胞系中转染两种TRIM22-siRNA后，提取蛋白后运用Western blotting检测敲低TRIM22对PI3K/AKT信号通路以及EMT标志性蛋白的影响。 结果： 1.TCGA数据库统计表明，与正常脑组织相比，胶质母细胞瘤组织中TRIM22的表达水平明显升高；与正常胶质星型胶质细胞相比，胶质瘤细胞系U87和U251中TRIM22的mRNA和蛋白表达水平与正常星形胶质细胞对比明显升高。 2.两种TRIM22-siRNA对于U87和U251中TRIM22干扰效果显著，TRIM22在mRNA和蛋白的表达均显著降低。 3.在U87和U251细胞系中用TRIM22-siRNA下调TRIM22表达后，CCK8法及细胞平板克隆实验结果表明，U87和U251细胞增殖能力显著下降。 4.运用细胞划痕损伤修复实验和体外Transwell实验发现在U87和U251细胞中转染TRIM22-siRNA下调TRIM22蛋白表达后，U87和U251细胞的增殖及侵袭能力都显著下降。 5.U87和U251细胞系转染TRIM22-siRNA后，PI3K/AKT信号通路明显收到抑制，EMT过程也受到明显抑制。 结论： 1.TRIM22在人脑胶质母细胞瘤组织及胶质母细胞瘤细胞系中与正常脑组织或正常星型胶质细胞相比表达明显升高。 2.TRIM22通过激活PI3K/AKT信号通路来调控人脑胶质瘤细胞的增殖能力。 3.TRIM22通过调控EMT过程促进人脑胶质瘤细胞的迁移和侵袭能力。

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