抑制CtBP2表达可减少食管鳞癌血管生成限制肿瘤进展

摘要

目的：研究CtBP2在调控食管鳞状细胞癌（Esophageal Squamous Cell Carcinoma,ESCC）血管生成中的作用，初步探讨CtBP2影响食管鳞癌血管生成可能的分子机制。 方法：（1）在组织水平，分别采用Western Blot法和免疫组织化学染色技术，对比食管鳞癌癌组织和癌旁正常组织中CtBP2的表达；采用免疫荧光技术，对比癌组织和癌旁正常组织中微血管数量。（2）在细胞水平，应用细胞转染技术，构建五种细胞系：转染Flag-CtBP2质粒的细胞系、转染CtBP2siRNA质粒的细胞系、转染Flag-Empty质粒的细胞系、转染Empty siRNA质粒的细胞系、未转染的ECA109细胞系，分别与血管内皮细胞共培养，建立五组共培养细胞体系。（3）对五组共培养细胞体系，用Western Blot法分别检测CtBP2表达量和CD31表达量；分别行血管成管实验，检测CtBP2表达水平对肿瘤血管新生的影响。（4）对五组共培养细胞，分别应用EdU核酸标记技术、流式细胞仪、细胞划痕实验，检测CtBP2表达水平对血管内皮细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响。（5）对五组共培养细胞，分别用实时定量聚合酶链反应（Quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）和酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immuno sorbent assay，ELISA），检测促血管生长因子——血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF），血小板衍化内皮细胞生长因子（platelet derived endothelial cell growth factor,PD-ECGF），碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）和白介素-8（interleukin-8,IL-8）的mRNA含量及其蛋白质含量，以明确CtBP2表达水平对这些促血管生长因子含量的影响。（6）用抗CtBP2抗体，对共转染Flag-CtBP2/MYC-Tel的细胞裂解物和共转染Flag-EMPTY/MYC-Tel的细胞裂解物进行免疫共沉淀，对比Tel含量；分别用抗IgG、CtBP2抗体和不加抗体，对共转染Flag-CtBP2/MYC-Tel的细胞裂解物进行免疫共沉淀，对比Tel含量；分别用抗IgG（对照组）和CtBP2抗体，对未转染质粒的ECA109细胞裂解物进行免疫共沉淀，对比Tel含量。同时，通过免疫荧光技术，检测CtBP2和Tel在共转染Flag-CtBP2/MYC-Tel的细胞中的位置。 结果：（1）食管鳞状细胞癌癌组织较癌旁正常组织CtBP2表达上调，且癌组织中微血管数量增加。（2）抑制食管鳞癌细胞系CtBP2的表达可限制血管内皮细胞的血管生成能力。（3）抑制食管鳞癌细胞系CtBP2的表达可限制血管内皮细胞的增殖和迁移、促进血管内皮细胞的凋亡。（4）抑制食管鳞癌细胞系CtBP2的表达可减少促血管生成因子的含量。（5）食管鳞癌细胞系的CtBP2可能通过与Tel相互作用，在细胞核形成CtBP2-Tel复合体发挥促肿瘤血管生成作用。 结论：（1）抑制ESCC细胞系的CtBP2表达，可通过抑制血管内皮细胞的增殖和迁移、促进内皮细胞的凋亡，以及减少促血管生成因子的释放来限制食管鳞癌的血管生成能力。（2）ESCC细胞系的CtBP2可能通过与Tel特异性结合，在细胞核形成CtBP2-Tel复合体，发挥促肿瘤血管生成作用。CtBP2-Tel复合体有望成为抑制食管鳞癌微血管新生方面的治疗靶点。

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