室旁核Alamandine调控高血压大鼠血压和交感神经活动作用及其机制研究

摘要

肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system,RAS)在高血压病发病中发挥重要作用。下丘脑室旁核(hypothalamic paraventricular nucleus,PVN)在维持心血管活动中起着关键作用，可直接支配交感神经节前神经元，参与外周交感神经活动的调节，与高血压的发生发展密切相关。Alamandine是一类新发现的RAS家族成员，结构与血管紧张素1-7类似，具有血管活性，通过与Mas相关性G蛋白耦联受体D（G-Protein–Coupled Receptor,member D(MrgD)）结合，在外周血管、心肌、中枢神经系统发挥作用。本研究采用Wistar-Kyoto(WKY)大鼠和自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHRs)，PVN微量注射不同剂量的alamandine，观察其是否参与调控高血压大鼠血压和交感神经活动，并探讨其机制。 目的： 1.探讨alamandine在室旁核能否调控交感神经活动和动脉血压； 2.探讨alamandine是否通过环磷酸腺苷（cyclic AMP,cAMP）-蛋白激酶A（protein kinase A,PKA）信号通路参与了调控交感活动和动脉血压。 方法： 1.实验在周龄12周的血压正常的WKY大鼠和SHR上进行。大鼠自由摄食和饮水，并保持12小时昼夜节律，大鼠麻醉后采用立体定位仪进行双侧PVN定位和微量注射药物，利用Powerlab生物信号采集系统在体记录肾交感神经活动（renal sympathetic nerve activity,RSNA）和平均动脉血压（mean arterial pressure,MAP）。 2.WKY大鼠和SHR各30只，分别分为5组，每组6只，分别在PVN微量注射生理盐水(saline)、alamandine（4,40,400pmol）、AngⅡ（40pmol）,观察大鼠交感神经活动和平均动脉压的变化。 3.WKY大鼠和SHR各24只，分别分为4组，每组6只，分别在PVN微量注射MrgD拮抗剂D-Pro7-Ang-(1-7)(50pmol)、cAMP(1nmol)、腺苷酸环化酶（adenylate cyclase AC）抑制剂SQ22536(2nmol)、PKA抑制剂Rp-cAMP(1nmol)，观察交感神经活动和平均动脉压的变化。 4.WKY大鼠和SHR各24只，分别分为4组，每组6只，给予D-Pro7-Ang-(1-7)(50pmol)预处理5分钟，cAMP(1nmol)、SQ22536(2nmol)、Rp-cAMP(1nmol)分别预处理8分钟后再注射alamandine(40pmol)，观察其对alamandine引起的RSNA和MAP效应的影响。 结果： 1.Alamandine剂量依赖性增加WKY大鼠和SHR的MAP和RSNA，其中中剂量(40pmol)和高剂量(400pmol)alanmandine能显著升高WKY大鼠和SHR的RSNA和MAP，在SHR上这一现象更为明显。但是低剂量alamandine（4pmol）对大鼠MAP和RSNA没有显著性作用。AngⅡ均使两种大鼠的RSNA和MAP升高，但在SHR上这一效应更为明显。比较alamandine和AngⅡ对同一种属大鼠的MAP和RSNA的影响，两者无统计学差异。 2.D-Pro7-Ang-(1-7)降低SHR的MAP和RSNA，但是对于WKY大鼠无影响。PVN预处理给予D-Pro7-Ang-(1-7)，阻断alamandine升高WKY大鼠和SHR MAP和RSNA的效应。 3.cAMP能增加WKY大鼠和SHR的MAP和RSNA，在SHR上这一效应更为明显。PVN预处理cAMP，增强alamandine升高MAP和增强RSNA的效应。AC抑制剂SQ22536，降低SHR的MAP和RSNA，但对于WKY大鼠无明显作用。SQ22536能够阻断alamandine对于WKY大鼠和SHR MAP和RSAN影响的效应。 4.PKA拮抗剂Rp-cAMP降低SHR的MAP和RSNA，但对于WKY大鼠无效，PVN预处理Rp-cAMP能阻断alamandine对于WKY大鼠和SHR MAP和RSAN影响的效应。 结论： 1.WKY大鼠和SHR双侧PVN微量注射Alamandine升高MAP和RSNA，存在剂量-效应关系，SHR较WKY大鼠升高MAP和RSNA更为明显。 2.Alamandine与MrgD结合，通过cAMP-PKA通路介导了alamandine升高MAP和RSNA效应。

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