延边朝鲜族与汉族2型糖尿病与PPAR-γ2、apM-1和PGC-1基因SNPs相关性的研究

摘要

目的：2型糖尿病(T2DM)是由于胰岛素抵抗或胰岛素分泌相对不足而导致慢性高血糖的一种常见的具有明显异质性的多基因遗传病，又称为复杂性疾病(complexdisease)。遗传因素在T2DM的发生发展中起着重要作用，其发病的遗传特征以多个微效基因(minor gene)和环境因素共同参与其致病过程。 本课题旨在分析中国延边的朝鲜族与汉族人群T2DM的发生发展的遗传特征和危险因素，并通过检测T2DM的候选基因过氧化物酶体增殖物激活受体-γ2(proxisome proliferators activated receptor-γ2，PPAR-γ2)、脂联素(adipnectin，apM-1)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ2共激活子1(peroxisomeproliferator-activated receptor-γcoactivatorl，PGC-1)基因单核苷酸多态性(singlenucleotide polymerphism，SNPs)的单体型及连锁不平衡(linkage disequilibrium，LD)与T2DM相关性分析，以期筛选T2DM的危险因子和单体型，为T2DM的诊断、治疗和预防提供理论依据。同时对中国延边的朝鲜族和汉族两个群体的遗传结构和亲缘关系分析提供遗传学上的证据。 方法 本课题分三部分实施。1．采用遗传流行病学手段，随机抽取延边地区朝鲜族和汉族222名T2DM患者作为先证者组，收集其一级亲属为1747人；糖耐量正常(NGT)对照组458名其一级亲属为2 261人；以问卷形式填写涵盖一般情况、生活习惯和体征，每个研究对象均绘制系谱，共进行27项实验室检查及体格检查；应用阈值理论估算T2DM的遗传率；利用Li-Mantel-Gsrt法进行同胞的分离比比较，分析T2DM的遗传模式；采用单因素和多因素非条件Logistic回归分析法，筛查T2DM的危险因素。2．通过生物信息学方法在NCBI的dbSNP数据库(Human SNPView)及HapMap数据库查找PPAR-γ2、apM-1和PGC-1基因的SNP位点，获悉数据库中已构建的单体型及单体型标签SNP(haplotype tag SNP，htSNP)，结合文献及研究现状确定本次分析的30个SNPs位点。采用聚合酶链反应－单链构象多态性(PCR-SSCP)技术及直接测序确定基因型，对延边地区散发T2DM患者259例(朝鲜族103人，汉族156人)及对照组221例(朝鲜族108人，汉族113人)进行基因型频率和等位基因频率病例-对照关联研究，采用SHEsis在线软件(http:202.120.7.14/analysis/)进行SNPs的单倍型和连锁不平衡分析，筛查T2DM危险因子。3．利用SNP Assistant version1.0.11(BioData，Ltd)软件在9个T2DM核心家系中进行PPAR-γ2、apM-1和JpGC-1基因8个常见SNPs位点传递不平衡检验(transm-ission-disequilibrium test，TDT)，判断各种SNPs与T2DM的连锁关系。 结果 1．遗传流行病学研究结果。 2．T2DM候选基因PPAR-γ2、apM-1和PGC-1的SNPs单体型连锁不平衡分析结果。 结论 1.确定延边地区2型糖尿病主要危险因素是糖尿病家族史、腰臀比、高血压、甜食摄入量，支持2型糖尿病是多基因遗传模式。 2．首次对中国延边朝鲜族和汉族PPAR-γ2、apM-1和DPGC-1三个T2DM候选基因进行部分基因片断扫描，检测到15个SNPs：Pro12Ala、C161T、-11391G>A、-11377C>G、-11156insCA、T45G(Gly15Gly)、+276C>A、+349A>G、R22 1 S、H241P、Thr394Thr、IVS2+52C>A、Gly482Ser、Thr528Thr、Ser577Leu；证实apM-1基因的R221S、H241P、11391G>A和PGC-1基因的Ser577Leu为罕见基因；鉴定可能不属于本地区的5个SNPs：apM-1基因+1711C>T、+1795A>G、+1833C>A和PGC．1基因Ser74Leu和Asp475Asp。尚未发现的SNPs为PPAR-γ22基因的Pro115Gln、Gln438Gln、Ser457Ser、Leu481Leu、IVS2+40C>T，apM-1基因．11426G>A、-11043C>T、G 162A(GIy54Val)和13PGC-1基因Ser74Leu、Leu410Iso、Leu438Ser。 3．15个SNPs的基因型频率和等位基因频率在朝鲜族和汉族之间无差异。中国延边地区的朝鲜族和汉族基因频率不存在民族差异，遗传结构基本相同，亲缘性较近。但存在种族和地域差异。 4．PGC-1基因IVS2+52C>A和Gly482Ser以及PPAR-γ2基因C161T多态可能通过影响脂质代谢来触发2型糖尿病发生。可能是延边朝鲜族和汉族2型糖尿病危险因子。5．PPAR-γ2基因C161T、apM-1基因-11377C>G、-11156InsCA、T45G、+276C>A、+349A>G和PGC-1基因IVS2+52C>A、Gly482Ser(G>A)8个标记位点未与2型糖尿病连锁。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：图表目录、缩略语

第一篇前言

第二篇延边地区2型糖尿病遗传流行病学研究

1前言

2材料与方法

2.1研究对象

2.2研究内容和方法

2.3统计分析方法

3.结果

3.1先证者一级亲属患病情况

3.2阈值模型分析遗传率

3.3分离比计算及遗传模式分析

3.4单因素分析

3.5多因素分析

4.讨论

参考文献

第三篇延边朝鲜族和汉族2型糖尿病PPAR-γ2、apM-1和PGC-1基因SNPs关联研究

1实验材料

1.1实验仪器

1.2主要试剂

1.3溶液的配制

2实验方法

3.1研究对象的选择及分组

3.2主要方法

3.3 PCR扩增

3.4纯化PCR扩增产物

3.5基因型检测

3.5统计学分析

4.实验结果

4.1 PCR结果

4.2 SSCP判读PPAR-γ2、apM-1和PGC-1三个基因15个SNPs基因型结果

4.3直接测序判读PPAR-γ2、apM-1和PGC-1三个基因15个SNPs基因型结果

4.4 T2DM患者组与NGT对照组一般特征比较

4.5 PPAR-γ2、apM-1和PGC-1基因15个等位基因的基因型频率和等位基因频率统计结果

4.6 PPAR-y2、apM-1和PGC-1基因15种SNPs基因型频率及等位基因频率在延边朝鲜族和汉族病例_对照关联性分析结果

4.7延边朝鲜族、汉族人群PGC-1基因IVS52+52C>A、Gly482Ser及PPAR-γ2基因Pro12Ala联合基因型与T2DM相关性分析

4. 讨 论

参考文献

第四篇 延边朝鲜族和汉族2型糖尿病家系易感基因传递不平衡（TDT）分析

1 对象与方法

1.1对象

1.2方法

2.实验方法

2.1仪器与试剂

2.2人类基因组DNA提取及鉴定

2.3PCR扩增

2.4基因型检测

3.结 果

3.1核心家系的一般特征比较

3.2核心家系中SNPs检测结果

3.3PPAR-Y2、apM-1和PGC-1三种基因8个SNPs与T2DM相关分析

3.4核心家系T2DM患者与NGT亲属SNPs位点之间连锁不平衡分析

3.5单体型分析结果

3.6核心家系T2DM患者和NGT亲属PGC-1 SNPs 各基因型与临床特征的关系

4.讨 论

参考文献

结 论

致 谢

附图及附表

综 述：2型糖尿病易感基因研究进展（1）

综 述：2型糖尿病易感基因研究进展（2）