草苁蓉乙醇提取物对人肝癌SMMC-7721细胞株增殖及凋亡的干预作用

摘要

目的：探讨草苁蓉乙醇提取物对人肝癌SMMC-7721细胞株生长抑制及诱导凋亡的影响，为其成为防治肿瘤的中草药物提供实验依据。 方法：选用人肝癌SMMC-7721细胞株进行体外培养，用MTT比色法测定不同浓度、不同时间段草苁蓉乙醇提取物对该细胞的抗增殖作用；应用倒置显微镜、HE染色光学显微镜、吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双染色荧光显微镜及透射电镜技术观察药物作用后的细胞形态学改变；应用流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡率的变化。 结果：1)MTT实验表明：草苁蓉乙醇提取物在0．25～1.0g/L范围内，于6h、12h、24h对人肝癌SMMC-7721细胞株均有抑制生长作用，并表现出浓度、时间依赖性关系。草苁蓉乙醇提取物在终浓度为1.0g/L时，于24h体外最大抑制率达到97.88％，与对照组比较具有显著性差异。2)倒置显微镜下，实验组SMMC-7721细胞生长缓慢，呈单层生长：细胞形态变圆，胞浆内可见空泡样改变；随着药物作用时间的延长肿瘤细胞贴壁能力逐渐减弱。HE染色光镜下，实验组SMMC-7721细胞体积变小，呈梭形：随着药物作用时间的延长细胞生长抑制作用更明显；部分细胞收缩变圆，胞浆嗜酸性增强，细胞核固缩成团块儿状，呈现出典型凋亡形态学改变。AO/EB双染色荧光显微镜下，实验组SMMC-7721细胞核体积缩小，细胞核内可见到致密浓染的块状或颗粒样的改变，发出橘黄色荧光；部分细胞表面有“出泡”现象。透射电子显微镜观察0.5g/L草苁蓉乙醇提取物处理后的肝癌细胞表面微绒毛部分脱落或全部消失，部分细胞表面有指状突起：细胞核呈不规则形，部分细胞核出现固缩，部分细胞核内染色质凝聚，呈块状分布；细胞质内出现空泡状结构，细胞器尚完整。3)流式细胞仪检测，对照组细胞凋亡率仅为0.04％：当0.5g/L草苁蓉乙醇提取物处理12h、18h、24h后细胞凋亡率分别上升为9.64％、11.65％，0、32.91％，与对照组相比有统计学差异，并随药物作用时间的延长呈增高趋势。细胞周期分析发现对照组G<,0>/G<,1>期、S期百分比分别为49.24％、18.33％：0.5g/L草苁蓉乙醇提取物处理12h、18h、24h后G<,0>/G<,1>期百分比均升高，S期百分比均下降，药物组与正常对照组相比均有统计学差异，G<,2>/M期百分比无明显改变，表明药物作用后SMMC-7721细胞被阻滞于G<,0>/G<,1>期。 结论： 1)体外实验中，草苁蓉乙醇提取物对人肝癌SMMC-7721细胞生长有抑制作用，呈现出量效和时效关系。 2)经凋亡形态学、流式细胞仪结果分析，草苁蓉乙醇提取物作用于人肝癌细胞SMMC-7721后均出现肿瘤细胞的凋亡改变。促进肿瘤细胞凋亡可能是草苁蓉乙醇提取物抗肿瘤作用的机制之一。 3)草苁蓉乙醇提取物通过干扰细胞周期抑制人肝癌SMMC-7721细胞的生长，该药物将SMMC-7721细胞阻滞于G<,0>/G<,1>期。干扰肿瘤细胞增生周期可能是草苁蓉乙醇提取物抗肿瘤作用的机制之一。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词表

第一章前言

第二章材料与方法

1材料

2方法

2.1细胞培养与传代

2.2细胞分组及药物处理

2.3倒置显微镜形态学观察

2.4微量细胞培养四氮唑蓝实验法(MTT法)

2.5 HE常规染色光学显微镜观察

2.6 AO/EB双染色荧光显微镜观察

2.7透射电镜细胞超微结构观察

2.8流式细胞仪检测

3统计学处理

第三章结果

1 MTT比色法检测草苁蓉乙醇提取物对人肝癌SMMC-7721细胞株增殖的影响

2人肝癌SMMC-7721细胞的形态学改变

3流式细胞仪检测结果

第四章讨论

第五章结论

致谢

参考文献

附 图

综述 草苁蓉的研究进展