P2Y受体激发HIF-1活性并对小鼠成神经细胞瘤细胞和小神经胶质细胞生长的影响机制

摘要

目的：研究P2Y嘌呤受体在小胶质细胞和成神经细胞瘤细胞中对缺血诱导因子1（hypoxia-inducible factor-1，HIF-1）的作用。
　　方法：
　　1.细胞培养，BV-2小鼠小胶质细胞和Neuro2a小鼠成神经细胞瘤细胞在加有10％牛胎血清的DMEM细胞培养液中，37℃，5%二氧化碳潮湿的培养箱中培养。
　　2.应用RT-PCR技术、RNA干扰技术、蛋白印迹技术和荧光素酶报告基因技术检测HIF-1及其应答基因mRNA转录和蛋白表达，并利用不同蛋白激酶特异性抑制剂，观察HIF-1表达与相关信息传导通路之间的关系，采用MTT法和3H-TdR掺入法检测小鼠成神经细胞瘤细胞和小神经胶质细胞中DNA合成和细胞增殖。
　　结果：
　　1．UTP时间依赖性的激活HIF-1蛋白表达，但对HIF-1α mRNA转录没有影响，说明其调控是在转录后和/或翻译水平上进行的。
　　2．UTP时间依赖性的激活HIF-1应答基因VEGF和GLUT1 mRNA转录。
　　3．HIF-1表达上调与PLC/PKC/[Ca2+]、PI3K/AKT/mTOR和ERK1/2信息通路的激活有关。
　　4．PI3K/AKT/mTOR、ERK1/2信息通路的激活与EGFR转录激活有关，后者激活又涉及c-Src和NADPH氧化酶信息通路。
　　5．HIF-1在UTP诱导的小鼠成神经细胞瘤细胞和小神经胶质细胞中DNA合成与细胞增殖中起重要作用。
　　结论：在小胶质细胞和成神经细胞瘤细胞中，UTP通过PLC/PKC/Ca2+和PI3-kinase/Akt传导通路增加HIF-1蛋白质的合成并激活其活性，而后通过HIF-1的活性促进细胞增殖。

目录

声明

INTRODUCTION

MATERIALS AND METHODS

Materials

Cell culture

Immunoblotting

Transient transfection and Luciferase assay

RNA Isolation and RT-PCR

Thymidine incorporation

Treatment of cells with siRNA

Statistical analyses

RESULTS

UTP increases HIF-1αprotein expression maybe at posttranscriptional and translational level

UTP induced HIF-1 regulated genes through HIF-1 activity

UTP induced HIF-1 activation through PLC/PKC/[Ca2+], PI 3-kinase/Akt/mTOR and ERK1/2 dependent pathway

UTP induced HIF-1 activation and Akt and ERK1/2 activation via EGFR transactivation

UTP induced DNA synthesis and cell proliferation

DISCUSSION

CONCLUSION

参考文献

致谢

Hypoxia-inducible factor 1:regulation by hypoxic and non-hypoxic activators