适应无血清培养的HEK293细胞系的培育与初步应用

摘要

动物细胞体外培养技术自上世纪60年代出现以来，始终以较快的速度发展。至今为止，血清仍然是一种被广泛使用的添加成分，但血清作为一种动物来源的培养物，常会引发一些争议性问题。新一代的无血清培养基的出现解决了这些问题，其成分明确、性质稳定、批次间差异小，为实验结果的准确性、可重复性提供了重要依据。
　　本研究采用培养液渐进替换的方法获，采用不同比例的适应液配比，逐梯度驯化人胚胎肾细胞（HEK293），得了一株适应无血清培养的HEK293细胞亚群（293SF）。驯化过程中，作者对培养条件进行优化，使293SF细胞系具有贴壁生长、悬浮生长双重特性。经检测293SF细胞形态规则；蛋白表达能力未发生明显变化；随着传代，细胞具有较高的稳定性。此外，293SF细胞支持复制缺陷型重组腺病毒的包装和复制，支持重组腺病毒介导的蛋白表达，并且以上性质随细胞的传代得到稳定保留。贴壁状态下生产腺病毒，细胞病变时间由110 h缩短到97 h，同时产率平均提高了43.3％，可降低腺病毒疫苗的生产成本，同时为腺病毒疫苗生产和加工提供了便利条件。悬浮状态下生产腺病毒，细胞病变时间约在72~84 h，毒价达到108.25 TCID50/mL，高于传统方法所获得的107.75 TCID50/mL。293SF细胞系在悬浮及贴壁状态下，293SF细胞对腺病毒的生产能力均高于传统的生产工艺，是今后293SF细胞系用于重组腺病毒疫苗商业化生产的重要优势。由于无血清悬浮培养的应用特点，此细胞系有望为腺病毒的无血清生产奠定材料基础。

目录

声明

第一章 绪论

1.1 无血清培养基的研究进展

1.1.1 无血清培养基概述

1.1.2 无血清培养基的成分

1.1.3 无血清培养基的应用范围

1.1.4 细胞适应无血清培养的方法概要及注意事项

1.1.5 细胞无血清培养的优点及缺点

1.2 动物细胞无血清培养技术的研究进展

1.2.1 动物细胞体外培养的特点及细胞生长特性

1.2.2 动物细胞体外培养中血清的作用及争议性问题

1.2.3 无血清培养基用于动物细胞培养的利弊及发展前景

1.3 HEK293细胞系

1.3.1 HEK293细胞系概述

1.3.2 HEK293细胞系亚群及特性

1.4 复制缺陷型腺病毒载体的研究进展

1.4.1 复制缺陷型腺病毒载体概述

1.4.2 复制缺陷型腺病毒载体疫苗的研究现状

1.4.3 复制缺陷型腺病毒载体的发展前景

1.5 本研究目的

第二章 适应无血清培养的HEK293细胞的建立及细胞系性质鉴定

2.1 材料与方法

2.1.1 细胞、抗体、培养基、病毒和其它材料

2.1.2 驯化和培养方法

2.1.3 细胞系的培养特性

2.1.4 细胞稳定性鉴定

2.2 结果

2.2.1 适应无血清培养的293SF细胞的形态学

2.2.2 细胞系的培养特性（贴壁和悬浮）

2.2.3 细胞稳定性

2.3. 讨论

2.3.1 细胞系的生长特征和稳定性

2.3.2 细胞系的优势和应用前景

2.3.3 细胞系的待完善之处和改进策略

第三章 重组腺病毒在293SF细胞系中的增殖与大规模培养

3.1 材料与方法

3.1.1 细胞、抗体、培养基、病毒和其它材料

3.1.2 重组腺粒转染试验（腺病毒包装能力测定）

3.1.3 重组腺病毒感染试验（腺病毒增殖能力测定）

3.1.4 腺病毒大规模培养条件的探索

3.2 结果

3.2.1 重组腺病毒在细胞系的包装和复制

3.2.2 重组腺病毒的增殖滴度、复制稳定性

3.2.3 腺病毒大规模培养最适条件

3.3 讨论

3.3.1 细胞系支持重组腺病毒包装和复制的能力

3.3.2 细胞系适应重组腺病毒疫苗规模化生产的能力

3.3.3 细胞系生产腺病毒方面待完善之处和改进策略

第四章 结 论

参考文献

致谢