PRRSV M蛋白细胞系的培育及其在细胞毒性T淋巴细胞检测方法中的应用

摘要

目的探讨PRRSV M基因在哺乳动物细胞NIH/3T3细胞中的表达,建立一种非放射性、简便易行的检测特异性细胞毒T淋巴细胞的方法。方法应用RT-PCR扩增得到M基因并克隆入真核表达载体pcDNA3,构建成重组表达载体pcD-NA3-M;将重组质粒转染至NIH/3T3细胞,G418筛选克隆;IFA检测M蛋白在转基因NIH/3T3细胞中的表达。用表达M蛋白的重组腺病毒rAd-M免疫小鼠,用表达M蛋白的NIH/3T3细胞和乳酸脱氢酶法检测PRRSV特异性细胞毒T淋巴细胞的杀伤效应。结果获得有G418抗性的NIH/3T3/M细胞克隆;IFA检测到有PRRSV M蛋白表达。重组腺病毒rAd-M免疫组可以诱发CTL应答,并明显高于wtAd和PBS对照组。结论培育成功一株能表达PRRSV M蛋白的细胞株NIH/3T3/M,可作为PRRSV CTL检测方法中的靶细胞,证明PRRSV M基因能够诱发特异性的细胞免疫。